N8130 氧化型辅酶Ⅱ（NADP）

索莱宝公司提供的氧化型辅酶Ⅱ二钠（NADP-Na2）基本信息如下：

北京索莱宝公司N8130氧化型辅酶Ⅱ主要用于生化研究；组织培养基的配制；电位测定等相关实验。
别名：辅酶Ⅱ钠盐；Coenzyme Ⅱ sodium salt
分子式：C21H26N7O17P3Na2 分子量：787.4
CAS＃：24292-60-2
外观：白色或浅黄色结晶粉末
特性：pH：约4.0(水：10mg/ml)
2-8℃储存N8130 氧化型辅酶Ⅱ  From Roche(solarbio N8130)

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辅酶ⅡNADP(H)含量试剂盒说明书

产品简介：

NADP+和NADPH含量测定可以计算NADP（NADPH + NADP+)含量和NADPH/NADP+比值，其变化与磷酸戊糖途径和生物合成以及抗氧化反应密切相关。NADPH/NADP+比值不仅是细胞氧化还原态的主要标志之一，而且在PPP途径、生物合成和抗氧化代谢中具有重要调控作用。

分别用酸性和碱性提取液提取样品中NADP+和NADPH。NADPH通过PMS的递氢作用，使氧化型噻唑蓝（MTT）还原为甲瓒，570nm下检测吸光值，从而测定NADPH含量。利用6-磷酸葡萄糖脱氢酶还原NADP+为NADPH，从而检测NADP+含量。

试验中所需的仪器和试剂：

可见分光光度计或酶标仪、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿或酶标板、研钵、冰和蒸馏水。

产品内容：

酸性提取液：50mL×1瓶，4℃保存； 

碱性提取液：50mL×1瓶，4℃保存； 

试剂一：基质缓冲液15 mL×1 瓶，4℃保存；   

试剂二：粉剂×1支，-20 ℃保存，用时加入4mL双蒸水，混匀； 

试剂三：粉剂×1支，-20℃保存，用时加入4mL双蒸水，混匀； 

试剂四：粉剂×1支，4 ℃保存，用时加入4mL双蒸水，混匀； 

试剂五：液体1.8mL×1支，4 ℃保存； 

试剂六：液体30mL×1瓶，4 ℃保存； 

试剂七：液体50mL×1瓶，4 ℃保存。

操作步骤：

一、NADP和NADPH的提取：   

1、血清（浆）中NADP和NADPH的提取： 

取0.1mL血清（浆），加入0.9mL酸性提取液，煮沸5min；冰浴中冷却后，10000g 4℃离心10min；取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和；10000g 4℃离心10min，取上清液冰上保存供测定NADP+含量。 

取0.1mL血清（浆），加入0.9mL碱性提取液，煮沸5min,冰浴中冷却后，10000g 4℃离心10min，取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，10000g 4℃离心10min，取上清液冰上保存供测定NADPH含量。 

2、组织中NADP和NADPH的提取： 

称取约0.1g组织，加入0.9mL酸性提取液，冰浴研磨，煮沸5min，冰浴中冷却后，10000g 4℃离心10min，取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，10000g 4℃离心10min，取上清液冰上保存供测定NADP+含量。 

称取约0.1g组织，加入0.9mL碱性提取液，冰浴研磨，煮沸5min，冰浴中冷却后，10000g 4℃离心10min，取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，10000g 4℃离心10min，取上清液冰上保存供测定NADPH含量。 

3、细胞或细菌中NADP和NADPH的提取： 

先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加入0.9mL酸性提取液，超声波破碎1min（强度20％，超声2s，停1s），煮沸5min，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min，取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的碱性提取液使之中和，10000g 4 ℃离心10min，取上清液冰上保存供测定NADP+含量。 

先收集400-500万细胞或细菌到离心管内，弃上清，加入0.9mL碱性提取液，超声波破碎1min（强度20％，超声2s，停1s），煮沸5min，冰浴中冷却后，10000g 4 ℃离心10min，取上清液至另一新的离心管中，加入等体积的酸性提取液使之中和，10000g 4 ℃离心10min，取上清液冰上保存供测定NADPH含量。

二、测定步骤(在1.5mLEP管中按下表依次加样）：

混匀，570nm下比色。

注意事项 

1、若用比色皿测，沉淀用试剂七溶解后必须立即测。最好加一个测一个。 

2、若用酶标板测，也必须在测定时再加试剂七，加入1000μL试剂七溶解沉淀，混匀后，取300μL至酶标板中，立即测定。 

3、不可将试剂一、二、三和四混合后再加，必须分开加。

三、NADP+和NADPH含量的计算：

（一）NADP+含量的计算 

1、血清（浆）中NADP+含量计算 

NADP+含量(μmol/L）= (测定管OD值-0.047）×376 

2、组织中NADP+含量计算 

(1)按样本蛋白浓度计算 

NADP+ (μmol/g prot）= (测定管OD值-0.047）×37.6÷样本蛋白浓度（g/L） 

(2)按样本鲜重计算 

NADP+ (μmol/g mass）= (测定管OD值-0.047）×37.6÷样本鲜重（g/L） 

3、细胞或细菌中NADP+含量计算 

(1)按样本蛋白浓度计算 

NADP+ (μmol/g prot）= (测定管OD值-0.047）×37.6÷样本蛋白浓度（g/L） 

(2)按细菌或细胞密度计算 

NADP+ (μmol/104cell）= (测定管OD值-0.047）×37.6÷细菌或细胞（104 cell /L） 

（二）NADPH含量的计算 

1、血清（浆）中NADPH含量计算 

NADPH含量(μmol/L）= (测定管OD值-0.047）×855 

2、组织中NADPH含量计算 

(1)按样本蛋白浓度计算

NADPH (μmol/g prot）= (测定管OD值-0.047）×85.5÷样本蛋白浓度（g/L） 

(2)按样本鲜重计算 

NADPH (μmol/g mass）= (测定管OD值-0.047）×85.5÷样本鲜重（g/L） 

3、细胞或细菌中NADPH含量计算 

(1)按样本蛋白浓度计算 

NADPH (μmol/g prot）= (测定管OD值-0.047）×85.5÷样本蛋白浓度（g/L） 

(2)按细菌或细胞密度计算 

NADPH (μmol/104cell）= (测定管OD值-0.047）×85.5÷细菌或细胞密度（104 cell /L）。