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全血基因组 DNA 提取试剂盒说明书 
货号：D1800 
规格：50T/ 100T 
保存：室温(15℃-25℃) 干燥保存，复检期 12 个月，2℃-8℃保存时间更长。 

D1800 全血基因组 DNA 提取试剂盒简介: 
D1800 全血基因组 DNA 提取试剂盒采用可以特异性结合 DNA 的离心吸附柱和独特的缓冲液系统，提取全血基因组 DNA。 离心吸附柱中采用的硅基质材料为本公司特有新型材料，能够高效、专一吸附 DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。 提取的基因组 DNA 片段大，纯度高，质量稳定可靠。使用本试剂盒提取的基因组 DNA可用于各种常规操作，包括酶切、 PCR、文库构建、Southern 杂交等实验。 
试验中的操作步骤： 
使用前请先在漂洗液和溶液 B 中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。 
1、样品的处理(本产品适用于处理新鲜的或已经添加抗凝剂的 0.lml-1ml 血液样品)： 
a、在血液样品中加入 2-3 倍体积的红细胞裂解液，充分颠倒混匀，12000rpm离心 1min，小心吸去上清，沉淀应为白色或淡红色，如果裂解不彻底，可重复以上述步骤一次。向沉淀中加 200ul溶液 A，振荡至彻底混匀。 
b、 如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量为 5-20u1，不需要再用红细胞裂解液处理，直接加 200ul 溶液 A，振荡至彻底混匀。 
2、向悬浮液中加入 20ul (10mg/ml) 的 RNase A，充分颠倒混匀，室温放置 10min。 
3、加入 20ul ( 10mg /ml ) 的蛋白酶 K，充分颠倒混匀，65℃水浴消化 30-60min，消化期间可颠倒离心管混匀数次，直至样品消化完全为止。 
4、加入2 倍体积溶液 B(使用前请先检查是否己加入无水乙醇)，充分颠倒混匀，此时可能会出现絮状沉淀，不影响 DNA的提取，可将溶液和絮状沉淀都加入吸附柱中，室温放置 2min。 
5、12000rpm离心 2min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。 
6、向吸附柱中加入 700ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇)， 12000rpm离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。 
7、向吸附柱中加入 500ul漂洗液，12000rpm离心 1min，弃废液，将吸附柱放入收集管中。 
8、12000rpm离心 2min，将吸附柱敞口置于室温或 50℃温箱放置数分钟，目的是将吸附柱中残余的漂洗液去除，否则漂洗液中的乙醇会影响后续的实验如酶切、PCR 等。 
9、将吸附柱放入一个干净的离心管中，向吸附膜中央悬空滴加 50-200ul 经 65℃水浴预热的洗脱液，室温放置5min，12000rpm离心 1min。 
10、离心所得洗脱液再加入吸附柱中，12000rpm离心 2min，即可得到高质量的基因组 DNA。 
实验过程中的注意事项: 
1、本试剂盒置于室温( 15 -25℃) 干燥条件下可保存12个月，更长时间的保存可置于2 -8℃。 
2、常用的血液抗凝剂有EDTA、ACD和肝素等，需注意的是，如欲制备大分子量血液基因组DNA，可优先考虑使用ACD抗凝。一般不使用肝素抗凝，因为用肝素抗凝的血液提取的基因组DNA进行PCR扩增时，有PCR扩增抑制现象。 
3、样品应避免反复冻融，否则会导致提取的DNA片段较小且提取量也下降。 
4、如果试剂盒中的溶液出现沉淀，可在65℃水浴中重新溶解后再使用，不影响效果。 
5、绝大多数哺乳动物的全血如入全血中的红细胞无核，故在提取基因组DNA时需去除不含DNA的无核红细胞，以免影响红细胞裂解和DNA释放。如果处理的血样为禽类、鸟类、两栖类或更低级生物的血液，其红细胞为有核细胞，因此处理量减少为5-20ul，不需要再用红细胞裂解液来裂解红细胞。 
6、洗脱缓冲液的体积最好不少于50ul，体积过小会影响回收效率:洗脱液的pH值对洗脱效率也有影响，若需要用水做洗脱液应保证其pH值在8.0左右(可用NaOH将水的pH值调至此范围)，pH 值低于7.0会降低洗脱效率。 
科研及实验操作涉及到的相关产品：
 D1850   全血基因组 DNA提取试剂系统 
 E1020   EB染色液 
 D1010   6×DNA Loading Buffer 
 T1060   50×TAE 缓冲液 
 T1050   5×TBE 缓冲液 
 M1060   D2000 DNA Ladder 
 M1400   1kb DNA Ladder 
 G8142   GoldView II型核酸染色剂(5000×) 

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