核蛋白提取试剂盒

核蛋白提取试剂盒说明书
货号：R0050
规格：50T/100T
产品内容：

保存：核/浆蛋白抽提试剂4℃保存，PMSF于-20 ℃保存。
核蛋白提取试剂盒简介：
核蛋白提取试剂盒提供了一种简单、方便的从培养细胞或新鲜组织中抽提核蛋白的方法。整个过程只需约60 分钟
就可以将核蛋白和浆蛋白从细胞中分离出来。得到的蛋白可以用于Western blot 等实验。本试剂盒通过浆蛋白
抽提试剂使细胞膨胀破裂，释放出胞浆蛋白，再通过离心得到细胞核。然后通过核蛋白抽提试剂抽提得到细
胞核蛋白。本试剂盒可以抽提50/100 个样品（每个样品约2×106 个Hela 细胞，40mg）。
操作方法：
裂解蛋白的所有步骤都需在冰上或4℃进行。
一、对于体外培养细胞：
1．根据用量取适当的浆蛋白抽提试剂和核蛋白抽提试剂加入PMSF，使PMSF 的最终浓度为1mM。PMSF
需现用现加，若目标蛋白含有丰富的半胱氨酸，可以在两种蛋白抽提液中加入DTT 至终浓度0.5mM。
2．对于贴壁细胞，去除培养液，用PBS 洗一遍，用细胞刮刀收集细胞，或用EDTA 消化后吹打下细胞（最
好不用胰酶硝化，以免胰酶消化目的蛋白）。500 g 离心2～3 分钟收集细胞，吸尽上清留下沉淀备用。
3．对于悬浮细胞：用PBS 洗一遍，500 g 离心2～3 分钟收集细胞，吸尽上清，留下细胞沉淀备用。
4．每20ul 细胞沉淀加入200ul 浆蛋白抽提试剂（2×106 个细胞沉淀约20ul 或40mg）。
5．用移液器吹打或高速涡旋15 秒（可适当延长），必须使细胞沉淀完全分散开成单细胞悬液。细胞沉淀分散
不完全会导致蛋白产量降低。
6．冰浴10 分钟。
7．最高转速剧烈涡旋10 秒，4℃ 12000～16000g 离心10 分钟。
8．上清即为抽提得到的细胞浆蛋白，立即吸取上清至预冷的样品管中备用，进行后续的PAGE、Western 等
实验，但蛋白浓度较低，可根据需要进行相应浓缩。
9．沉淀即为细胞核，要完全吸尽残余的上清（避免细胞浆蛋白的污染），加入50-100ul 核蛋白抽提试剂。
10．用移液器吹打或高速涡旋15 秒（可适当延长）至沉淀完全分散，冰浴10 分钟。
11．最高转速剧烈涡旋10 秒，4℃12000～16000g 离心10 分钟。
12．立即吸取上清至预冷的样品管中，此即为抽提得到的细胞核蛋白。可进行后续实验或-70℃冻存。
对于组织样品：
把组织称重后，尽可能切成非常细小的碎片，按每50mg 组织加入200ul-500ul PBS，用匀浆器冰上匀浆
制成细胞悬液，500 g 离心2～3 分钟收集细胞，吸尽上清，收集沉淀。加入200ul 浆蛋白抽提试剂后接上述步骤5。
实验操作中的注意事项：
1．裂解得到的蛋白样品，由于含有较高浓度的去垢剂干扰，不能用Bradford 法测定蛋白浓度，可以选用本公
司生产的BCA 蛋白定量试剂盒(货号PC0020)测定蛋白浓度。
2．对于组织样品，本试剂盒适用于新鲜组织，对冻存组织抽提效果较差。
3．为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
科研及实验操作涉及到的相关产品：
P1020 1×PBS，PH7.2-7.4，0.01M
P1010 4×蛋白上样缓冲液（含β-巯基乙醇）
S1010 10% SDS
PR1400 低分子量蛋白MARKER
PC002 BCA 法蛋白浓度测定试剂盒
PC0030 Lowry 法蛋白浓度测定试剂盒