蛋白

BCA蛋白浓度测定试剂盒
货号：PC0020 规格：500微孔(500T)
保质期：本试剂盒自订购之日起一年内有效。
产品内容：
包装（500微孔) 保存 BCA试剂 100ml 室温 Cu试剂 3ml 室温 PBS稀释液 30ml 室温 BSA蛋白标准 (5mg/ml BSA) 1ml -20℃
产品简介： 碱性条件下，蛋白将Cu2+还原为Cu+， Cu+与BCA试剂形成紫蓝色的络合物，测定其在562nm处的吸收值，并与标准曲线对比，即可计算待测蛋白的浓度。常用浓度的去垢剂SDS，Triton X-100，Tween不影响检测结果，但受螯合剂(EDTA，EGTA)、还原剂（DTT，巯基乙醇）和脂类的影响。实验中，若发现样品稀释液或裂解液本身背景值较高，可试用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
操作说明： 一 . 微孔酶标仪法 1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。 2. 稀释标准品：取10微升BSA标准品用PBS稀释至100微升（样品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/ml。将标准品按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白标准品孔中，加PBS补足到20微升。 3. 将样品作适当稀释（最好多做几个梯度，如作2倍、4倍、8倍稀释），加20微升到96孔板的样品孔中。由于移液器在取小量时的误差，标准线前面的点可能不很准确，所以尽可能的让样品点落在标准线1/2后。 4. 各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置15-30分钟。用酶标仪测定A562nm，根据标准曲线计算出蛋白浓度。使用温箱孵育时，应注意防止因水分蒸发影响检测结果。二 . 分光光度计法如没有酶标仪，可用分光光度计在离心管中混匀后加入比色皿中比色。 步骤如下： 1. 配制工作液: 根据标准品和样品数量，按50体积BCA试剂加1体积Cu试剂（50:1）配制成BCA
工作液，充分混匀(混合时可能会有浑浊，但混匀后就会消失)。BCA工作液室温24小时内稳定。
2. 稀释标准品：取100微升BSA标准品用PBS稀释至1ml（样品一般可用PBS稀释），使终浓度为0.5mg/ml。 3. 取八支（或者更多）5ml离心管，标上号，按下表加入试剂。
离心管号
1
2
3
4
5
6
7（样品管1）
8（样品管2）
9（样品管3）
标准蛋白BSA
0
40ul
80ul
120ul
160ul
200ul
200ul适当稀释的样品1
200ul适当稀释的样品2
……
PBS
200ul
160ul
120ul
80ul
40ul
0
0
0
0
BCA工作液
2ml
2ml
2ml
2ml
2ml
2ml
2ml
2ml
2ml
4. 37℃放置15-30分钟。用分光光度计测562nm处吸光值，根据标准曲线计算出蛋白浓度。
注意事项：
1. 长期不用时，Cu试剂与PBS稀释液可置于2-8℃保存，如发现细菌污染则应丢弃。BCA试剂在低温条件下出现结晶沉淀时，可37℃温育使其完全溶解, 不影响使用。
2. 样品中若含有较多干扰物质时，请采用Bradford蛋白浓度测定试剂盒。
3. 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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