产品描述: 蛋白酶K是从真菌Tritirachium album中纯化的丝氨酸内肽酶,分子量为28.9 kD。蛋白酶K具有较广泛的底物特异性,可以降解天然的及变性的蛋白、糖蛋白、肽和氨基酸酯。蛋白酶K在较广泛的温度(37ºC – 65ºC)和pH(4.0 – 12.5)条件下都是稳定的,在去污剂如Triton X-100、Tween-20和SDS 存在的情况下仍能保持活性。蛋白酶K已被用于多种分子生物学研究,包括核酸纯化过程中核酸酶(Dnase和RNase)的失活。BIOO Scientific提供的蛋白酶K是冻干粉末,同时提供优化的缓冲液,使蛋白酶K能发挥最大活性。
产品规格: 10 mg冻干粉末,能溶于1 mL本品中提供的蛋白酶K储存缓冲液。
缓冲液: 25 mM Tris-Cl pH 8 / 10 mM CaCl2 / 50% 甘油
特异活性: >30 单位/mg 固体
单位定义: 1单位酶能在37ºC 1分钟内从血红蛋白中释放相当于1微摩尔酪氨酸的福林阳性的氨基酸/多肽。
活性: 蛋白酶 K 在1% Triton X-100, 5% Tween 20, 和 0.2 – 1% SDS 等变性剂中有活性。SDS (0.2% – 1%) 和尿素(1M – 4M)可刺激活性。蛋白酶K 不被金属离子、螯合剂(e.g. EDTA)、巯基试剂或胰蛋白酶/麋蛋白酶蛋白抑制剂失活。
温度范围: 37ºC – 65ºC. 蛋白酶K 在65ºC 的活性比 25ºC的活性高12倍。蛋白酶K 在温度65 ºC 之上迅速变性。
pH 范围: 4.0 – 12.5, pH 8.0有最适活性. 在pH 范围6.5 – 9.5之间可有几小时的完全活性。
失活: 蛋白酶 K 在95ºC 加热10分钟、使用PMSF等蛋白酶抑制剂或用苯酚/氯仿抽提均可失活。
稳定剂: 钙离子 (Ca++) 可保护蛋白酶 K 不自溶并增加其热稳定性。
反应缓冲液: 推荐反应缓冲液: 50 mM Tris-Cl pH 7.5 / 10 mM CaCl2.
反应条件: 加入蛋白酶 K 至终浓度50 – 100 ug/mL,在 37 – 56ºC.温育,温育时间视蛋白污染的程度和特异性用途而定; 30 min – 1 小时通常足够
储存条件: 冻干粉在4ºC可稳定储存不超过1年。4ºC时在缓冲液中可稳定保存数周。蛋白酶 K还可在含 50%甘油的缓冲液中于-20ºC 保存数月。