大鼠生物活性全段甲状旁腺激素检测试剂盒
【产品名称】
通用名称：大鼠生物活性全段甲状旁腺激素检测试剂盒
英文名称：Rat BioActive Intact PTH ELISA Kit
【包装规格】
96人份/盒
【预期用途】
本试剂盒仅供科研使用，测定大鼠血浆或细胞培养液中的生物活性全段甲状旁腺激素水平。
【简介】
大鼠全段甲状旁腺激素（PTH）是由甲状旁腺生成的一种84氨基酸多肽，其生物活性位于多肽的N端区域。甲状旁腺激素对维持离子钙在实现正常的代谢功能所需要的浓度范围内起着重要的作用。当血清钙水平降低，甲状旁腺分泌的激素增加，会导致钙从骨骼储备进入循环。当血清的钙水平增加时，甲状旁腺分泌的激素减少。
大鼠和人体生理学在相关钙代谢之间的相似性，使大鼠成为一个很好的活动物模型，用于研究人类骨骼疾病和可能改变骨骼重建的临床前药物制剂评价。本试剂盒对大鼠生物活性全段甲状旁腺激素的定量检测对骨和矿物质代谢变化提供了准确和敏感的评估。
【检验原理】
大鼠生物活性全段甲状旁腺激素检测试剂盒是一种用于检测大鼠血清或细胞培养液中的甲状旁腺激素水平的双位点酶联免疫测定。两个亲合纯化的山羊多克隆抗体用于检测大鼠甲状旁腺激素的全方位生物活性的完整片断。可识别多肽C 端部分的抗体经生物素标记被捕获。可识别N -端部分的其他抗体与辣根过氧化物酶偶联后用于检测。
包含大鼠全段PTH的样本与生物素标记后捕获的抗体和HRP偶联抗体同时在微孔中孵育。样本中包含的全段PTH（1-84）与捕获抗体和检测抗体免疫结合形成“夹心抗体”复合物：
微孔/生物素-抗大鼠PTH—大鼠全段PTH—HRP抗大鼠PTH
在孵育后期，清洗微孔去除任何未结合抗体和其它物质。微孔中的酶结合物与底物溶液同时孵育反应并且用酶标仪检测。抗体复合物结合到微量板中的酶活性与样本中的大鼠PTH量成正比。由每个标准品的吸光度对应其浓度绘制标准曲线。样本中大鼠生物活性全段PTH的浓度直接从曲线中得出。
【试剂的准备和贮存】
收到试剂后试剂盒保存在2-8ºC：复溶的标准品和质控品在-20ºC或更低温度下保存。试剂盒的有效期参照试剂盒的标签。所有组分都同样稳定至有效期。
所有试剂使用前要平衡至室温并且轻柔地倒置混匀。不同批号的试剂不能混用。
【样本收集和保存条件】
全段PTH分子不稳定，随着时间的推移免疫反应性降低。样本采集后应尽快保存。由于分子变量的不稳定性，对生物活性全段PTH浓度的测定应使用EDTA血浆或细胞培养液。（不再建议采用血清样本。）需要50微升血浆或培养液一式两份检测样本。用离心机分离样本，并从细胞中分离血浆或培养液。样本应立即检测或冰冻保存在-20℃或以下。避免反复冻融样本。
各种麻醉药的使用可引起血液PTH浓度显著升高。因此，规定研究中使用一致的样本收集程序。(见 ref. #4)
【操作注意事项】
1.建议所有标准品、质控品和样本双孔检测。每个双孔检测的平均吸光度用于减少数据的差异和校正结果。
2. 对光敏感的试剂(例如：HRP偶联抗体，包含生物素抗体和HRP偶联抗体的工作抗体溶液，ELISA HRP底物)放在原本的琥珀瓶或其它能起避光作用的容器中。
3. 未使用的微孔板条保存在附有干燥剂的铝箔袋中，以避免受潮。
4. 样本和试剂应小心吸取尽可能在微孔不产生气泡。
5. 每个试剂加入的次序和时间很重要，因为免疫学和酶学反应是速率反应模式。清洗步骤在整个实验过程中也同样重要。强烈建议使用自动洗板机。所有吸取和清洗步骤应该尽能做到时间安排一致。
6. 样本结果大于最大标准品浓度时应用0 pg/mL标准品做1:10稀释并且重新实验。结果乘以10。(见局限性#1，# 2)
7. 血浆或细胞培养液样本可能包含纤维蛋白凝结或细胞碎片。冻融的血浆样本将加速凝结形成。这些样本须离心和轻轻倒出除去能引起非特异性结合的颗粒物质。
【产品性能特征】
【灵敏度】
大鼠生物活性全段PTH检测的灵敏度是20次双孔检测0 pg/mL标准品的95%可信区间为3pg/mL。
【精密度】
为评估批内分析精密度平均值和变异系数，20次检测两个样本每次单独分析。
|
平均值(pg/mL) |
变异系数 |
|
54 |
3.9% |
|
157 |
2.5% |
为评估批间分析精密平均值和变异系数，两个样本双孔测定20次后计算均值和变异系数。
|
均值(pg/mL) |
变异系数 |
|
55 |
8.9% |
|
163 |
7.8% |
【线性】
用0 pg/mL的标准品稀释血清和血浆样本，并检测。结果如下：
|
样本 |
稀释 |
观察值 |
期望值 |
% O/E |
|
1 |
不稀释 |
87 |
|
|
|
1:2 |
41 |
43 |
95 |
|
|
1:4 |
20 |
22 |
91 |
|
|
2 |
不稀释 |
138 |
|
|
|
1:2 |
66 |
69 |
96 |
|
|
1:4 |
32 |
35 |
91 |
|
|
3 |
不稀释 |
222 |
|
|
|
1:2 |
106 |
111 |
95 |
|
|
1:4 |
47 |
56 |
84 |
【回收率】
各种不同的大鼠全段PTH值加入到三个不同的大鼠血浆样本中并进行测定。结果用pg/mL表示并显示如下：
|
样本 |
原始值 |
加入数量 |
观察值 |
期望值 |
% O/E |
|
1 |
17 |
29 |
45 |
46 |
98 |
|
|
57 |
76 |
74 |
103 |
|
|
|
86 |
100 |
103 |
97 |
|
|
2 |
19 |
46 |
64 |
65 |
98 |
|
|
91 |
112 |
110 |
102 |
|
|
|
137 |
155 |
156 |
99 |
|
|
3 |
14 |
17 |
30 |
31 |
97 |
|
|
34 |
47 |
48 |
98 |
|
|
|
50 |
65 |
64 |
102 |
【交叉反应】
大鼠生物活性全段甲状旁腺激素酶联免疫试剂盒是针对特定的全段1-84分子。 N 末端1-34，中段区域，C 端39-84和其他非1-84段将无法测量。本试剂盒中的抗体，也将检测鼠全段PTH生物活性形式。然而，这两个物种的甲状旁腺肽抗体的相对亲和力是未知的。其他哺乳动物的交叉反应未知。
【参考文献】
1. Schultz VL, Garner SC, Lavigne JR, Toverud SU, “Determination of bioactive rat parathyroid hormone (PTH) concentrations in vivo and in vitro by a 2-site homologous immuno-radiometric assay”, Bone and Mineral 27 (1994) 121-132.
2. Jara A, Bover J, Lavigne J, Felsenfeld A, “Comparison of Two Parathyroid Hormone Assays for the Rat: The New
Immunoradiometric and the Older Competitive Binding Assay”, J Bone Miner Res, Vol. 9, No. 10, 1994, p. 1629.
3. Rucinski B, Mann GN, Epstein S “A new rapid and reproducible homologous immunoradiometric assay for amino-terminal parathyroid hormone in the rat,” Calcif Tissue Int, 1995, 56:83-87.
4. Schultz VL, Boass A, Garner SC, Toverud SU, “Several
Anesthetics, but Not Diethyl Ether, Cause Marked Elevation of Serum Parathyroid Hormone Concentration in Rats”, J Bone Miner Res, Vol. 10, No. 9, 1995, p. 1298.
5. Urena P, Kubrusly M, Mannstadt M, Hruby M, et al., “The renal PTH/PTHrP receptor is down-regulated in rats with chronic renal failure”, Kidney International, Vol. 45 (1994), pp. 605-611.
6. Mallya SM, Buchberger G, Arnold A, “Effects of anesthetic agents on serum parathyroid hormone and calcium concentrations in mice.” Veterinary Anesthesia and Analgesia, 2007, 34: 403-407.1.
【生产企业】
生产者名称：Immutopics, Inc.
生产者/生产场所地址：San Clemente, CA 92673
售后服务机构：北京荣志海达生物科技有限公司
地址：北京市海淀区永定路88号长银大厦12层
B12室
电话：+86 10 58895646 +86 20 32293178
传真：+86 10 58895611 +86 20 32293177
电子邮箱：info@rz-biotech.com
网址：www.rz-biotech.com
【说明书批准及修改日期】2011年11月9日
仅供参考，请以原版英文说明书为准！
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