转基因大豆GTS40-3-2品系基因定性检测试剂盒产品说明书(中文版)

主要用途

YIJI转基因大豆GTS40-3-2品系基因定性检测试剂是一种旨在根据品系特异性转基因分子标志和内源性保守序列设计引物，针对种子、食品、饲料等样本DNA进行PCR扩增，获得特异性条带，来识别或定性鉴定其转基因大豆成分的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以被用于各种种子、食品、饲料等大豆品系GTS-40-3-2的鉴定。可用于后续测序、载体克隆等实验。产品即到即用，性能稳定，操作简便，扩增特异。

技术背景

转基因农产品（genetically modified organism；GMO）成为食品安全的重要问题，标记和监测作为市场准入的法律依据。目前至少有40多种转基因农作物作为食品使用，其中大豆（soybean）是常见品种之一。由美国孟山都（Monsanto）公司开发的品系GTS-40-3-2，1996年进入市场，其商标名称为RoundReady Soybean（RRS），已经有100多种品种（varieties）。品系GTS-40-3-2由花椰菜花叶病毒（cauliflower mosaic virus）35S启动子（promoter）、矮牵牛（Petunia hybrida）的叶绿体转运肽（chloroplast transit peptide；CTP）基因和叶绿体转运肽4前导序列（leader sequence）、抗草甘膦（glyphosate）基因5-烯醇式丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶基因（5-enolpyruvylshikimate-3-phosphate synthase；EPSPS）、根癌农杆菌（Agrobacterium tumefaciens） 胭脂氨酸合酶（nopaline synthase；NOS）转录终止子等外源性基因元素构成，通过PV-GMGT04载体转化到大豆品种A5403而成。其中CT4 EPSPS基因，（1365碱基，编码456氨基酸），作为功能性抗草甘膦基因，是品系GTS-40-3-2的分子标记。通过CT4 EPSPS基因交界片段和大豆内源性凝集素（lectin）基因的引物设计，扩增其特异产物，进行识别、定性、定量鉴定种子、食品、饲料等转基因大豆成分。 

产品内容

YIJI扩增液（Reagent A）  900微升

YIJI品系引物液（Reagent B）  40微升

YIJI补充液（Reagent C）  1毫升

YIJI大豆引物液（Reagent D）  40微升

产品说明书  1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里；有效保证6月

用户自备

PCR级矿物油：用于封隔反应液

PCR仪：用于样品扩增

PCR管或平板：用于PCR反应的容器

琼脂糖凝胶电泳：用于扩增后电泳分析

实验步骤

实验开始前，从－20℃冰箱中取出试剂，放进冰槽里融化。然后进行下列操作：

• 针对一个样本，每次移出15微升YIJI扩增液（Reagent A）到PCR管
• 加入1微升用户自备的的待测DNA样品（总量100至200纳克）
• 加入2微升YIJI品系引物液（Reagent B）或YIJI大豆引物液（Reagent D）
• 再加入7微升YIJI补充液（Reagent C）（反应总量为25微升）
• 即刻放进微型台式离心机瞬时离心5秒，速度为500g（或2000RPM；例如eppendorf 5415）
• （选择步骤）加入50微升用户自备的PCR级矿物油（注意：参见注意事项9）
• 即刻进行热启动PCR反应：

• 反应完毕后，移取5微升进行1.8%琼脂糖凝胶电泳：  

• 如果继续测序鉴定，胶回收PCR产物（建议使用YIJI高质纯化胶回收试剂盒；YJ20007.2）
• 进行后续的测序反应

注意事项

• 本产品为20次操作
• 操作时，须戴手套
• 建议使用带滤芯的枪头，避免污染
• 在－20℃冰箱里储存的产品避免反复冻融
• 出现大豆扩增条带：证明为大豆或含有大豆的样品
• 出现品系扩增条带：证明为GTS-40-3-2转基因大豆或含有转基因成分的样品
• 可以将扩增产物纯化后，克隆到质粒中，然后进行测序
• 如果需要测序，可以订购测序引物
• 根据用户PCR仪的性能，决定是否加入矿物油（Mineral Oil）
• 本公司提供系列转基因生物分析试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定无核酶污染
• 本产品经鉴定检测特异

使用承诺

上海一基秉着“信誉至上、客户满意、质量承诺”的宗旨为我们的用户提供优质产品和服务。用户收到货后，应按照产品说明书上的规定妥善保管并在有效期内使用。我们的产品在销售前已作严格的质量鉴定，保证说明书所述的使用效果。在货到后10天内若发现确属本产品的质量问题，请立即以书面形式（实验报告）与本公司联系，并将该产品退回，经检验确系产品质量所致，本公司负责更换产品。如系使用者错误操作所致，本公司不承担由此造成的损失。