EB病毒介导永生化淋巴细胞系制备试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI  EB病毒介导永生化淋巴细胞系制备试剂是一种旨在使用高滴度EB病毒感染新鲜的B淋巴细胞，产生永久繁殖的类淋巴母细胞细胞系（lymphoblastoid cell line）的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。适合于各种正常和疾病人体、动物淋巴细胞永生化的制备。其制备效率高，活力保证。产品即到即用，严格无菌，性能稳定。

技术背景

爱泼斯坦巴尔病毒（Epstein-Barr virus；EBV），又称为人类疱疹病毒4（human herpesvirus 4），是Anthony Epstein和Yvonne Barr于1964年首次成功地将丹尼斯伯基特（Danis Burkitt）发现的非洲儿童淋巴瘤细胞通过体外悬浮培养而建株，并在建株细胞涂片中用电镜观察到疱疹病毒颗粒而命名的。其中，人体Hawley EB病毒株作为转化型病毒，广泛用于体外转化静息B淋巴细胞，在细胞毒性T细胞抑制剂的帮助下，通过CD21（CR2）受体进入B细胞，产生永生化类淋巴母细胞系（immortalized lymphoblastoid cell line），不断繁殖，从而提供免疫、分子和功能研究的生物源材料，以及基因组DNA的原始材料，同时长期保存各种疾病相关性细胞库；用于研究EB病毒本身的潜伏性和肿瘤生成机制；用于制备单克隆抗体和MHC蛋白抗原等。 

产品内容

YIJI培养液（Reagent A）   500毫升

YIJI抑制液（Reagent B）   200微升

YIJI转化液（Reagent C）   10 X 500微升

产品说明书 1份

保存方式

保存YIJI培养液（Reagent A）在4℃冰箱里，YIJI抑制液（Reagent B）在－20℃冰箱里，YIJI转化液（Reagent C）在-70℃冰箱里，避免反复冻融，注意生物安全；有效保证3月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于样品操作的容器

25和75cm²细胞培养瓶：用于细胞培养的容器

二氧化碳细胞培养箱：用于细胞培养

4℃台式离心机：用于样品操作

光学显微镜：用于观察细胞形态

实验步骤

实验开始前，将－20℃冰箱里的试剂置于冰槽里冻融，同时将YIJI培养液（Reagent A）置于37℃恒温水槽预热。然后进行下列操作。

• 准备好新鲜分离（2小时内）的5毫升淋巴细胞悬液（2 X 10⁶细胞/毫升）
• 转移到15毫升锥形离心管
• 放进台式离心机离心10分钟，速度为600g
• 小心抽去上清液
• 加入5毫升预热的YIJI培养液（Reagent A），混匀细胞颗粒群
• 转移到25cm²细胞培养瓶里
• 加入20微升YIJI抑制液（Reagent B），充分混匀
• 竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育60分钟
• 置于37℃恒温水槽快速冻融1管YIJI转化液（Reagent C）
• 加入500微升YIJI转化液（Reagent C）到细胞培养瓶里，充分混匀
• 竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育1至2周（注意：可见培养液变成桔黄色，细胞成小团聚集；务必不要等到溶液颜色为纯黄色）
• 加入5毫升新鲜的YIJI培养液（Reagent A），混匀
• 竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育3天
• 小心移去5毫升陈旧培养液
• 加入5毫升新鲜的YIJI培养液（Reagent A），混匀
• 竖立放进37℃二氧化碳培养箱里孵育3天（注意：溶液颜色为桔红色，换液为佳，务必不要等到溶液颜色为纯黄色）
• 每隔3天重复实验步骤14至16一次，持续3周（注意：可见细胞成较大团聚集，且细胞总量达5 X 10⁶）
• 转移到50毫升75cm²培养瓶里继续培养或分装成1 X 10⁶ 细胞/毫升/管冻存
• （选择步骤）传代培养：1 X 10⁵/毫升
• 光学显微镜观察：5周后成团细胞形态（10 X）

注意事项

• 本产品为10次操作
• 所有操作均须在无菌状态下进行
• 操作时，须戴手套和防护口罩
• 操作时，注意生物安全；培养废液专门收集和消毒处理
• YIJI转化液（Reagent C）具有有害性，切忌用手接触，做好防护
• 通常2至3周时间可以制备永生化细胞

7． 分离的淋巴细胞活力检测建议使用YIJI细胞活力台盼蓝染色试剂盒－GMS10009

• 本公司提供系列永生化细胞制备产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定制备的细胞维持正常活性