超白金Tag DNA聚合酶产品说明书

超白金Tag DNA聚合酶产品说明书（中文版）

主要用途

超白金Tag DNA聚合酶是一种旨在方便、快速地进行各种复杂基因组模板，小片断DNA，保真度要求高，扩增有难度的DNA扩增的重要反应分子。广泛运用在DNA片段在5kb之内的PCR/RT-PCR/微卫星DNA扩增、DNA测序等技术操作。产物留有3′端A尾巴，可直接克隆。产品即到即用，无核酶污染，性能稳定，灵敏度、特异性、稳定性优势明显，扩增产量高。

技术背景

超白金Tag DNA聚合酶是一种热稳定的由单条蛋白多肽组成（分子量约为94 kDa）的DNA聚合酶。通过将Thermus aquaticus DNA聚合酶的基因克隆，在大肠杆菌（E. coli）中表达后，分离纯化而得到的。其具有5′－3′DNA聚合酶活性和5′－3′核酸外切酶活性，但无3′－5′核酸外切酶的活性。

超白金Tag DNA聚合酶的单位定义为在74℃条件下，30分钟内能够吸收10mM dNTPs，形成酸性不溶性物质所需的酶量作为一个活性单位。单位活性测试条件是：25mM TAPS（pH9.3），50mM KCl，2mM MgCl2，1 mM DTT，0.5mg/ml鲑鱼精DNA，0.2mM dNTPs。

超白金Tag DNA聚合酶的储存缓冲成分包括50％甘油，20mM Tris－HCl（pH8.0），0.1mM EDTA，1 mM DTT，稳定剂。

产品内容

超白金Tag DNA聚合酶（Reagent A）（5U/微升） 40微升

 10倍PCR完全缓冲液（Reagent B）    1毫升

 10倍PCR无镁缓冲液（Reagent C）    1毫升

 25mM MgCl2（Reagent D）     500微升

 补充液（Reagent E）          1.5毫升

产品说明书          1份

保存方式

经常使用，保存在－20℃冰箱里；长期储存，保存在－70℃冰箱里，避免反复冻融；有效保证6月

实验提示

下列的反应体系为推荐使用，用户可以按照自己的反应体系操作：

• 一次反应总量为50微升，依次加入下列建议使用的用量到0.5毫升PCR管里：

• 混匀，瞬时离心5秒
• 建议使用的PCR反应程序为：

• PCR产物置于－20℃保存，直到进行任何后续实验
• 进行琼脂糖凝胶电泳分析

注意事项

• 本产品为200酶单位总量
• 建议整个操作在4℃下进行
• 建议使用洁净的PCR管和带有滤芯的枪头，以免污染
• 操作时，须戴手套
• 操作时，避免污染母液
• 根据用户实际情况，调整各反应物成分的用量
• 本产品建议使用赠送的 10倍PCR完全缓冲液（Reagent B）和补充液（Reagent E）。该缓冲液经过精心研制、成功实验证明的。用户无需调整镁离子浓度。其含有Ammonium Sulfate, Tris, Magnesium Chloride, Beta-Mercaptoethanol等
• 根据用户PCR仪的性能，决定是否加入矿物油（Mineral Oil）
• 配制完成后，即刻进行扩增反应，以确保反应物的活性
• Tm=4（G+C）+2（A+T），用户可以测试最佳Tm温度。扩增片段3kb以上可以增加时间到2分钟
• 对于基因组DNA的扩增，其循环延长时间为30秒至3分钟，即小于500bp－30秒；小于2kb－1分钟；大于2kb，每增加1kb，增加1分钟
• 避免反复冻融
• 本产品同时分别提供 10倍PCR无镁缓冲液（Reagent C），其中含有100mM Tris－HCl（pH  9.0）,500 mM KCl, 1%Triton X－100和 25mM MgCl2（Reagent D）溶液，便于用户选择。建议 25mM MgCl2（Reagent D）可以在50微升反应体系终加入3微升，其终浓度为1.5mM
• 本公司提供PCR一步法反应体系

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定无核酶污染
• 本产品经鉴定反应产量高