石蜡切片罗丹宁（RHODANINE）铜染色试剂盒产品说明书（中文版

主要用途

石蜡切片罗丹宁（RHODANINE）铜染色试剂是一种旨在使用标准化的化学脱蜡方法和罗丹宁结合铜蛋白反应技术，分析存档中的石蜡包埋的组织切片中铜沉积现象的权威而经典的技术方法。该技术经过精心改良、成功实验证明的。主要适用于石蜡包埋组织切片的铜分子检测。广泛用于肝组织病理生理的研究。产品严格无菌，即到即用，操作简捷，性能稳定，显色清晰。

技术背景

细胞浆里含有以结合蛋白形式的铜分子，然而过多铜分子的存在将产生毒性作用，尤其在肝脏组织，导致急性肝炎、晚期肝纤维化和慢性渐进性梗阻性黄疸等。遗传性威尔逊氏症（Wilson’s disease）为典型肝内铜增多症。罗丹宁（RHODANINE），一种双位螫合剂（bidentate chelating agent），与铜蛋白具有强力亲和性。一旦反应，产生亮红色或桔红色沉积，以证明铜分子的存在。与红氨酸染色比较，罗丹宁染色更为敏感。

产品内容

脱蜡液（Reagent A）         300毫升

补水液A（Reagent B）  100毫升

补水液B（Reagent C）  100毫升

补水液C（Reagent D）  100毫升

补水液D（Reagent E）  100毫升

清理液（Reagent F）   50毫升

染色液（Reagent G）   50毫升

产品说明书    1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，密闭瓶盖；染色液（Reagent G），避免光照； 有效保证6月

用户自备

无离子水：用于制备染色工作液

苏木素复染试剂盒（80067）：用于常规染色后复染

小型染色缸：用于石蜡切片的去石蜡和染色操作

培养箱或烘箱：用于脱蜡或染色孵育操作

光学显微镜：用于细胞染色后观察分析

实验步骤

• 脱蜡处理

• 取出10片待测的10微米厚石蜡包埋的组织切片（注意：石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，此步很重要）
• （选择步骤）放进80℃烘箱，孵育30分钟
• （选择步骤）室温下静置15分钟
• 按下表依次放进小染色缸里孵育

• 小心移去切片上的补水液D（Reagent E）
• 小心加上200微升清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 室温下孵育5分钟
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F） 

• 样本染色处理

操作开始前，将4℃冰箱里的试剂盒中的染色液（Reagent G）置入室温下预热。准备1个50毫升小型染色缸，移取10毫升充分摇匀的染色液（Reagent G）到染色缸里，加入40毫升用户自备的无离子水，涡旋混匀后，标记为染色工作液，避免光照。然后进行下列操作。

• 小心将切片置入50毫升染色工作液中（注意：确保整个切片样品浸泡在工作液里）
• 在60℃培养箱里孵育3小时；或直至可见红色
• 取出切片，小心移去切片上的染色工作液 
• 小心加上200微升清理液（Reagent F）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 小心移去切片上的清理液（Reagent F）
• 重复实验步骤4至5二次 

三、 样本复染处理

• （选择步骤）样本复染处理（苏木素）
• 小心加上200微升补水液B（Reagent C）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 小心移去切片上的补水液B（Reagent C）
• 小心加上200微升补水液A（Reagent B）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 小心移去切片上的补水液A（Reagent B）
• 小心加上200微升脱蜡液（Reagent A）在切片上，铺满整个切片样品表面
• 小心移去切片上的脱蜡液（Reagent A）
• 放上盖玻片或封片
• 即刻在一般光学显微镜下观察：铜沉积阳性细胞呈现亮红色或砖红色或桔红色（如果复染：细胞核呈现蓝色）

注意事项

• 本产品为50次操作
• 操作时，须戴手套
• 试剂具有挥发性，注意用后密闭瓶盖
• 石蜡包埋前，组织切片须用10％甲醛4℃条件下，固定16小时，否则造成样品支离破碎
• 样品染色避免过度，期间可以在显微镜下观察染色程度 
• 可以置于37℃培养箱里孵育16小时
• 染色液（Reagent G）具有不溶性颗粒，使用前，须摇匀，使颗粒均匀分布在溶液里
• 染色工作液不宜长期久放
• 正常肝或脾脏组织含有大量铜，可以作为阳性对照
• 低浓度铜的组织染色后，会出现轻度褪色现象
• 建议使用苏木素复染试剂盒（80067）
• 封片前使用脱蜡液（Reagent A）透明处理，可能会出现褪色
• 染色完成后，即刻进行光学显微镜观察 
• 本公司提供系列组织细胞金属元素染色试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定显色清晰