RNA甲基化修饰试剂盒

RNA甲基化修饰试剂盒

此品非常适合从细胞与组织等样本中提取的总RNA，进行RNA甲基化修饰操作，整个实验时间仅需3小时。

重点提示

使用必读： 使用：采用RNA甲基化修饰试剂盒处理得到的转化RNA对于像甲基化特异性PCR， MS-HRM，和亚硫酸盐测序如：焦磷酸测序和深度测序是非常理想的。其中总RNA可以是 来自哺乳动物，植物，真菌，细菌和病毒等样本中得到的。  

RNA输入量：对于每次亚硫酸盐实验RNA的输入量是5 ng-1 ug.最为理想的RNA的输入 量应该是200 – 500 ng。当使用RNA甲基化修饰试剂盒做甲基化特异性RT-PCR时，RNA的 输入量可以少至<10 ng，但是PCR循环数应该多于45。RNA处理后的得率取决于RNA的输 入量，自然的RNA量和起始材料来源。

起始材料：非常适合使用各种细胞和组织样本，比如：来自培养瓶和微孔板培养的细胞， 新鲜和冷冻的组织，石蜡包埋组织，血液，体液样本等等。

预防措施:       为了避免交叉污染，接下来的预防措施是非常有必要的。F-Spin Columns：仔细地吸 取样本或溶液到 F-Spin Columns。使用灭菌的枪头并在转移完不同的溶液时随时更换。在 将 F-Spin Columns 放到微型离心机前始终保证盖子是盖紧的。在整个操作步骤中必须带干 净的手套。为了避免手套接触到样本，应该理科更换手套。

产品简介

最新报道，5-甲基胞嘧啶（5-mC）不仅广泛的存在于基因组 DNA 中，在 RNA 中也普 遍存在。但是，RNA 甲基化的功能仍不清楚。有些研究认为 RNA 甲基化在翻译调控中起着 重要作用，而有些研究认为其在 RNA 的稳定性及结构中起着重要作用。在人类中, 5-mC 会 出现在各种不同形式的 RNA 分子上，包括 tRNAs,rRNAs,mNRAs,非编码 RNA(ncRNAs)等。 至少有 10275 个的 5-mC 候选位点被发现在 mRNAs 和 ncRNAs,它覆盖了 10.6%残留在转 录组的总胞嘧啶。5-mC 似乎浓缩在某些类型的 ncRNA,但相对缺乏 mRNAs。然而,绝大多 数(83%)的候选位点中发现在mRNAs。在这些转录组上, 5-mC 似乎耗尽在蛋白质编码序列， 且浓缩在 5’和 3’UTRs。两个不同的甲基转移酶,NSUN2 和 DNMT2 已知催化 5-mC 修改在 真核生物的 RNA。最近强有力的数据表明,RNA 胞嘧啶甲基化作用影响着调节各种生物过 程，如 RNA 稳定性与信使核糖核酸（mRNA）的翻译。此外,损失 5-mC 在 vault RNAs 导 致异常的处理成 Argonaute-associated 小 RNA 片段,可以作为小分子核糖核酸(即 microRNA) 。 因 此 , 受 损 的 处 理 的 vault ncRNA 可 能 与 导 致 人 类 疾 病 的 病 因 NSUN2-deficiency 人类疾病相关。亚硫酸氢盐转化 RNA,紧接着是 RT-PCR 扩增、克隆和 可信的测序分析，来收集可靠的关于 RNA 胞嘧啶甲基化状态的信息，变得尤为重要。由于 RNA 的不稳定性，导致对于 RNA 的研究十分困难。为此，我公司给您强烈推荐 RNA 甲基 化修饰试剂盒，解决了如上的问题。该产品包括了进行修饰所有必要组件，独特设计的混合 液配方包含了 RNA 的保护剂，以防降解。这样有效保证了胞嘧啶转化成尿嘧啶，而甲基化 的胞嘧啶几乎不受影响。

无毒的 RNA 紧紧的结合在离心柱基质上， RNA 可以有效去除残余的亚硫酸氢和盐， 得到纯净的修饰 RNA。洗脱后的 RNA 可以用于做 qMSP（即 RT-PCR），克隆，MS-HRM 和测序分析（如：焦磷酸分析和深度测序）等各种 RNA 甲基化后续实验分析。产品功能简 介如下：

有效且高效地准备转化好的RNA用于各种下游实验分析。

RNA甲基化修饰试剂盒。这个

工具是专门为亚硫酸氢盐转化和验证RNA而设计的，具有如下的优势和特性：

l 快速简便的操作流程仅需 3 小时   l 将未甲基化的 RNA 胞嘧啶（C）完全转化为尿嘧啶（U），转化率>99.9% ；不当或错误的转化 率<0.1% (甲基化胞嘧啶转化成胸腺嘧啶)。  l 强给力的 RNA 保护剂有效防止了 RNA 的降解，保护了>90%的 RNA。  l 包括的对照引物是专门针对特异转化后的 RNA 设计的，可以用来测试其是否完全正确的实现了 亚硫酸盐转化。  l 可用于亚硫酸盐转化的 RNA 低至每次反应 5 ng  l 简单、可信和实验条件始终如一。  

原理/步骤

 RNA甲基化修饰试剂盒包括了所有定性修饰总RNA样本的必要试剂。独特转化试剂包含了 RNA保护剂，有效防止了化学试剂和嗜热试剂的降解。这样提高了胞嘧啶转化为尿嘧啶的 效率，胞嘧啶脱氨基作用可以可以忽略不计。无毒的RNA捕获溶液增强了RNA结合在柱基 质上的能力，这样转化后的RNA可以有效地被洗脱同时将亚硫酸氢盐和盐分彻底清除。更 值得一提的是，在这个试剂盒中我们配套的提供了一对特异性的甲基化引物，极大地方便了 您进行qMSP（甲基化定量PCR）分析。