特别提示：包括尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）
英文名称：Uracil -DNA glycosylase (UDG)
产品货号：SV1106
产品规格：5KU|1KU

特性:
去除 PCR 残存污染
去除 DNA 尿嘧啶碱基
概述:
E. coli 尿嘧啶-DNA 糖基化酶（UDG）催化从含尿嘧啶的 DNA 上释放尿嘧啶。UDG 能有效地水解单链或双链 DNA 上的尿嘧啶，但不能从 6 碱基或更少的寡核苷酸上水解尿嘧啶。
来源:
克隆有 E. coli UDG 基因的重组 E. coli 菌株。
应用:
在 37℃ 条件下，1 单位 UDG 与 0.1 μg 含尿嘧啶 DNA 温育 10 分钟后，此 DNA 不能再被 DNA 聚合酶复制。95℃ 加热 10 分钟可使该酶 95% 的活性丧失。由于 95℃ 热处理后该酶仍有部分活性，建议加入尿嘧啶糖基化酶抑制剂来阻止产物 DNA 的降解，也可以立即用酚/lǜ仿抽提反应产物。
反应条件:
1X UDG 反应缓冲液
[20 mM Tris-HCl，1 mM EDTA，1 mM DTT（pH 8.0 @ 25℃）]，37℃ 温育。
质保声明:
尿嘧啶-DNA 糖基化酶经过严格的质控检测，确保该产品具有最高的活性和纯度。
单位定义:
1 单位指每分钟催化 60 pmol 尿嘧啶从含尿嘧啶的双链 DNA 上释放所需要的酶量。通过检测 37℃ 条件下，30 分钟从 50 μl 含 0.2 μg DNA（104～105 cpm/μg）的反应体系中释放 [3H]-尿嘧啶的量来确定活性。
浓度:
5,000 units/ml。
注意事项:
UDG 在较广的 pH 范围均内有活性，最适 pH 为 8.0，不需要二价阳离子。活性受高离子强度（＞ 200 mM）所抑制。

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名称：T4聚核苷酸激酶
货号：BTN120506
规格：250U
T4聚核苷酸激酶能够催化ATP的γ-位磷酸基团转移到寡核苷酸链(双链或单链DNA或RNA)的5′-羟基末端以及3′-单磷酸核苷上。本产品还具有3′磷酸酶活性，将3′-磷酸基团从寡核苷酸的3′磷酸末端、脱氧3′-单磷酸核苷和脱氧3′-二磷酸核苷上水解掉。其反应示意图如下：


产品用途：
1．DNA或RNA的末端标记，用作寡核苷酸探针和进行DNA测序。
2．寡核苷酸5′末端的磷酸化，以便进行连接反应。
3．除去3′磷酸基团。

产品组成：

成分	规格
T4聚核苷酸激酶，10U/μL	25μl
10×反应缓冲液	1ml
说明书	1份

储存条件：低温运输，-20℃保存，有效期一年。

活性定义：1 单位指在37℃条件下，30分钟内催化 1nmol 酸不溶性 [32P] 掺入所需要的酶量。

1×反应缓冲液：[70mM Tris-HCl(pH7.6@25℃)，10mM MgCl2，5mM DTT]，37℃温育。

热失活：65℃加热20分钟。

来源：重组E.coli菌株，克隆有T4多聚核苷酸激酶或修饰的T4多聚核苷酸激酶基因。

自备试剂：0.5M EDTA(pH8.0)、[γ-32P或γ-33P]-ATP或0.1mM ATP、DNA纯化试剂盒。

使用方法：

一、DNA 5′末端标记：
1．参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA	1～50 pmol(5′末端)
10×反应缓冲液	5μL
自备的[γ-32P或γ-33P]-ATP(3000Ci/mmol)	50pmol
补充无核酸酶的去离子水	至48μL
T4聚核苷酸激酶,10U/μL	2μL

2．按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3．37℃孵育30分钟。
4．加入自备的1μL 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5．后续可以使用酚lǜ仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。DNA纯化试剂盒可以向我公司订购。

二、DNA 5′末端磷酸化：
1．参考如下表格设置反应体系：

待磷酸化DNA	1～50 pmol(5′末端)
10×反应缓冲液	5μL
自备的0.1mM ATP	3μL
补充无核酸酶的去离子水	至48μL
T4聚核苷酸激酶，10U/μL	2μL

2．按上表设置好反应体系后，轻轻混匀(可以用移液器吹打混匀或用Vortex在最低速度轻轻混匀)，随后离心沉淀液体。
3．37℃孵育30分钟。
4．加入自备的1μl 0.5M EDTA(pH8.0)混匀，以终止反应。
5．后续可以使用酚lǜ仿抽提、乙醇沉淀等方法纯化标记的DNA，也可以使用适当的DNA 纯化试剂盒进行纯化。