adapter快速连接试剂（illumina)

特别提示：包括adapter快速连接试剂（illumina)在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：adapter快速连接试剂（illumina)
英文名称：Fast Ligation Reagent
产品货号：WH0201
产品规格：24次|96次

本制品是专门针对于illumina高通量测序平台所优化的预混酶模块。使用本模块可以将3"端带有dA尾的DNA片段与adapter进行快速连接。与常规方法比较，本模块采用了一步法反应流程，BaiSeq Fragmentation/DNA末端修复/加dA尾试剂或BaiSeq DNA末端修复/加dA尾试剂反应后所获得的片段后DNA，无需磁珠纯化，可使用本模块直接与adapter进行连接，省去了多步磁珠纯化步骤，操作更加简便，文库转化效率更高。适用样本量：0.25ng～1μg DNA。

产品特点：
·无需磁珠纯化，可直接将DNA adapter与带有dA-Tailing的DNA片段连接。
·连接高效，可进行微量样本的DNA adapter连接。

适用范围：
将DNA adapter与3"端添加dA的DNA文库片段的快速连接（如Fragmentation/DNA末端修复/加dA尾试剂或DNA末端修复/加dA尾试剂处理后的产物）

试剂盒组成：

组分	24次	96次
DNA Ligase	240μl	960μl
5×Ligation Buffer	500μl	2×1ml
Nuclease-Free ddH2O	1ml	2×1ml

保存条件：-25～-15℃保存，避免反复冻融，保质期为一年。

注意事项（请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项）
1．操作过程请注意避免核酸样品和产物之间的交叉污染。
2．请使用不含RNA酶或DNA酶的枪头、EP管进行试验。
3．试验开始前，请清洁操作台，并使用RNA酶及DNA清除试剂处理台面，确保没有RNA酶和DNA的污染。
4．进行文库扩增前，请确保PCR仪已经调试好并处于稳定的状态。
5．试验前请仔细阅读说明书，如果需要暂停试验，或者无需立即进行下游试验。可根据说明书推荐将试验产物保存于-20℃并安排后续试验。

操作步骤：

1．DNA片段经Fragmentation/DNA末端修复/加dA尾试剂或DNA末端修复/加dA尾试剂处理，完成A尾添加反应后，向此50μl反应体系中加入Y μl的adapter溶液，轻柔吸打混匀后置冰上。
  注意：本试剂盒中不含测序DNA adapter，推荐配合Single-Indexed Adapter（Illumina? Platforms) （WH0206)使用，为了达到较高的连接效率，我们推荐反应体系中DNA片段与adapter的摩尔比在10:1至200:1之间，详见WH0206产品说明书。
2．按照下表所示各组分用量配制反应体系，并将配制完成的反应体系轻柔混匀后置于冰上。

成分	使用量
5×Ligase Buffer	20μl
DNA Ligase	10μl
Nuclease-Free ddH2O	（20-Y)μl

  注：对于多个样品，请计算所需试剂的总体积并在此基础上额外添加10%的试剂，以避免分装过程中枪头挂壁损失而导致试剂体积不足。
3．将此配制好的（50-Y）μl连接反应液加入至第1步准备的反应液中，轻柔吸打混匀，置于20℃中反应15min。
  注意：此步骤如果使用PCR仪进行反应，请不要启动热盖。
4．向反应产物中加入0.8×体积（80 μl）Agencourt AMPure XP磁珠进行纯化，具体步骤如下：
①将AMPure@XP磁珠置于室温平衡20 min。
②涡旋使磁珠充分悬浮，加入80 μl Agencourt AMPure XP磁珠至步骤3溶液中，充分吸打混匀。
③室温孵育5 min，将反应管置于磁力架上1～2 min。待磁珠完全贴壁后，用移液器吸弃上清。
④向反应管内加入200 μl 80%乙醇，轻轻震荡混匀，洗涤磁珠，并用磁力架回收磁珠，弃上清。
⑤将含有磁珠的反应管置磁力架上，开盖室温放置5~10 min，至晾干。
  注：不要过分干燥磁珠，否则会造成得率降低。
⑥加入25 μl 10mM Tris-HCl （pH 8.0)至离心管内并使用移液器轻轻吸打磁珠至充分悬浮。将反应管放置于磁力架上1~2 min，只使磁珠完全贴壁后，转移约20 μl上清至新的离心管中，用于后续的PCR富集实验。
  注：如果需要对DNA片段大小进行选择，则请参照DirectFast DNA Library Kit （illumina) （WH0203)说明书中片段分选步骤进行操作。如果连接产物无需进行PCR富集，可在步骤g)中加入12.5 μl的10mM Tris-HCl （pH 8.0)洗脱DNA，并转移10 μl纯化后的DNA用于后续的试验反应。如不立即使用，请将样品冻存于-20℃保存。

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