磁珠法DNA纯化回收试剂

特别提示：包括磁珠法DNA纯化回收试剂在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：磁珠法DNA纯化回收试剂
英文名称：MagBeads DNA Purification Kit
产品货号：WE0205
产品规格：5ml|50ml

  本试剂提供了一种简单、快速、高效的核酸纯化方法。该产品可用于二代测序建库时DNA的选择性或非选择性回收，以及PCR产物的纯化回收。MCPure与样品按一定比例混合后，磁珠选择性将核酸吸附。经两步漂洗后，洗脱得到的DNA纯度高，A260/A280的比值在 1.7-1.9之间, A260/A230的比值通常在2.0以上。经该试剂盒纯化得到的DNA适用于PCR，Real-Time PCR， 测序，southern blotting等实验。

试剂盒组成：

组份	96次
Buffer KCL	96ml
Buffer KCW1(浓缩液)	72ml
Buffer KCW2(浓缩液)	60ml
Buffer EB	30ml
蛋白酶K	2×25mg
蛋白酶K 储存液	2×1.25ml
Magbeads PN	4ml

自备仪器及试剂：磁力架|80%乙醇|洗脱液：Buffer EB(10 mM Tris-HCl, pH 8.0)；去离子水(pH在7.0-8.0之间)。

产率举例：

片段长度	典型产率
5000 bp	高至90%
1000 bp	高至90%
500 bp	高至80%
200 bp	高至70%

实验前准备及重要注意事项：
1、冰冻、离心、超声会对MCPure中的磁珠造成不可逆的损害。
2、MCPure中磁珠长期放置后会聚集成团，从而使磁珠表面积减小，降低样品回收得率，使用前一定要涡旋振荡彻底混匀磁珠。
3、使用前，建议将MCPure涡旋震荡混匀后分装到1.5ml的离心管中，每管分装1mlMCPure。
4、本试剂不适用于纯化回收小于100 bp的DNA片段，如果要回收小于100 bp的DNA片段，建议将MCPure的用量增加到样品体积的4倍。
5、进行DNA的选择性回收时，MCPure对于DNA溶液中的离子浓度较为敏感。不同厂家的二代测序建库试剂得到的接头连接后的DNA溶液以及PCR扩增产物中离子浓度不同，所以用MCPure做DNA选择性回收时,试剂用量有所不同。

操作步骤：
1、涡旋振荡MCPure 20秒，使其彻底混匀为均一溶液。
2、向1.5ml的离心管中加入纯化的DNA溶液。
3、向上一步的离心管中加入2倍样品体积的MCPure，涡旋震荡5秒后室温静置5分钟。
4、将上一步的离心管放于磁力架上，直至磁珠完全吸附(约需5分钟)。
5、保持离心管固定于磁力架上，彻底弃去溶液，期间避免接触磁珠。
6、继续保持离心管固定于磁力架上，向离心管中加入250μl新鲜配置的80%乙醇。
7、保持离心管固定于磁力架上，待悬起的磁珠完全吸附后彻底弃去乙醇。
8、重复步骤6-7两次。
9、保持离心管固定于磁力架上静置放置10分钟，使乙醇完全挥发干净。
10、将离心管从磁力架上取下，加入20-100μl EB(自备)或去离子水，涡旋振荡使磁珠完全重悬于洗脱液中后，室温放置5分钟。
11、将离心管放于磁力架上直至磁珠完全吸附(约需5分钟)。
12、将洗脱液转移至一个新的1.5ml离心管中。此时，可弃去磁珠。

纯化回收得率的计算：
我们建议通过琼脂糖电泳纯化前后的样品进行回收得率的计算。我们不建议通过260 nm处的光吸收值来计算回收得率。因为溶液中单链、双链DNA和dNTP以及一些纯化前的某些杂质在260 nm处都有光吸收，这样在计算回收前样品中DNA浓度时会得到一个假的、虚高的DNA浓度。

储存条件：室温(15～30℃)

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名称：柱式毛发DNA提取试剂盒
货号：BTN80805
规格：50次
动物毛发不容易降解，同时含有大量的线粒体，所以是考古研究、法医研究和线粒体研究等领域的重要性实验材料。目前市场上专门用于毛发样品DNA提取的产品很少，为此我们研发了本产品。

产品特点：
1.充分的酶法降解和快速的柱式提取相结合，前者使DNA充分释放，后者使杂质充分被去除。
2.DNA回收率一般在0.5μg/100mg左右(理论产率一般是0.1-1.5μg之间)。
3.DNA纯度高，OD比值一般在1.6-1.8之间。
4.提取的DNA能够用于电泳、酶切、杂交检测和PCR。
5.适合于动物的各种毛发。

试剂盒组成：

成分	规格
溶液A	50mL
蛋白酶K溶液(10mg/ml)	1mL
溶液B	15mL
溶液C	50mL
离心吸附柱(15层膜)	50套
通用洗柱液	50mL
DNA洗脱液	5mL
说明书	1份

储存条件：常温运输及保存(蛋白酶K溶液需要-20℃保存)，有效期一年。

使用方法：
1.将30-50mg左右毛发充分剪碎(成芝麻大小就可以)，最后转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：最好从靠近根部的地方剪取样品。
2.加入1mL溶液A(使用之前需取本次实验所需的溶液A现加入自备的β-巯基乙醇，β-巯基乙醇的终浓度为5%)和20μL蛋白酶K溶液(20mg/mL)，37℃保温10小时(一般过夜保温就可以)。
 注意：最好让反应体系处于摇晃状态，此保温长度一般可以让毛发溶化。
3.加入0.3mL的溶液B和0.2mL的自备lǜ仿，振荡器上振荡30秒充分混匀。
4.12000rpm室温离心3分钟，小心将上清转移到新的1.5mL塑料离心管中。
5.在上清液中加入等体积的溶液C，上下颠倒30秒充分混匀。
6.将混合液分两次转移到离心吸附柱中。每次是先将0.7-0.8mL混合液转移到离心吸附柱中，室温放置2分钟，12000rpm室温1分钟，弃穿透液。再把剩余的一半上柱，重复此操作。
7.将0.7mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
8.将0.3mL通用洗柱液加入到离心吸附柱中，12000rpm离心半分钟(此步为第二次洗涤，一般可以省略)。
9.空甩离心吸附柱半分钟去除残留液体。
10.将离心吸附柱放置在一新的1.5mL塑料离心管中，加入30μL通用洗脱液。
11.12000rpm离心1分钟，管底即为毛发DNA溶液，可立即用于PCR，也可长期保存在－20℃。
 注意：由于头发中DNA的含量十分少，所以电泳检测时即使全部上样也只能看见十分微弱的DNA条带。