新型冠状病毒N蛋白ELISA试剂盒

特别提示：包括新型冠状病毒N蛋白ELISA试剂盒在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：新型冠状病毒N蛋白ELISA试剂盒
英文名称：SARS-CoV-2 Nucleoprotein ELISA Kit
产品货号：Q20001
产品规格：96T

本试剂盒采用ELISA方法定量检测血清、细胞培养上清中的SARS-CoV-2，能特异性识别SARS-CoV-2 N蛋白(Nucleoprotein,NP)。试剂盒包含重组SARS-CoV-2 N蛋白及其抗体。本试剂盒经过重组的SARS-CoV-2 Nucleoprotein(货号：Q15502)验证，也可识别重组SARS-CoV Nucleoprotein(货号：Q13012)，但不识别MERS-CoV Nucleoprotein(货号：Q15199)。

特别说明：
1．由于天然样品的复杂性和难以预测的干扰，需要终端用户自己验证其有效性。
2．本产品仅用于研究，不能用于临床诊断或治疗。

检测原理：


试剂盒组成：
 

组分	规格
酶标条(预包被SARS-CoV-2 NP兔单抗)	12条×8孔
SARS-CoV-2 NP酶标检测抗体	0.2mg/mL
SARS-CoV-2 NP标准品(冻干粉，重组)	1管
20×浓缩洗涤缓冲液	25mL
20×浓缩稀释缓冲液	8mL
5×样品裂解液	6mL
显色液A	13mL
显色液B	13mL
终止液	8mL

保存条件：2～8℃，有效期6个月(未拆封)，为保证检测结果的可靠性拆封后请尽快用完。

使用方法：

注意事项：
1．使用前应将试剂盒的所有组分和待检样本温度恢复到室温。
2．本试剂盒中的终止液为酸溶液，应注意小心操作。
3．冻存样本检测前应彻底化冻并混匀，并注意避免反复冻融。
4．每次试验均需制备相应的标准曲线，不同试剂盒以及不同天的标准曲线不能混用。
5．注意在不同样本和步骤间及时更换加样槽和枪头，避免交叉污染。
6．读取光吸收值应在加入终止液后二十分钟内完成。

实验流程图：


一、试剂准备：
使用前应将试剂盒的所有组分和待检样本温度恢复到室温。

1．1×洗涤缓冲液配制：
  如浓缩洗涤缓冲液中已形成结晶，请平衡到室温至结晶完全溶解，混匀后取20mL 20×浓缩洗涤缓冲液至去离子水或超纯水中，定容至400mL。
2．1×稀释缓冲液的配制：
  如果浓缩稀释缓冲液中已形成结晶，请平衡到室温至结晶完全溶解，混匀后取5mL 20×浓缩稀释缓冲液至去离子水或超纯水中，定容至100mL。
3．检测抗体的配制：
  使用前10,000g离心20秒，然后用1×稀释缓冲液将酶标检测抗体稀释至工作浓度，0.5 μ g/mL。
4．底物液的配制：
  使用前15分钟将显色A液、显色B液等体积混合，避光。确保底物液不被污染，如混合后的底物液已经变蓝，请勿使用。
5．标准品复溶：
  将1mL 1×稀释液加入到冻干标准品的安瓶中制备标准品储液，充分溶解，混匀后（勿翻转管子）等体积分装，-80度保存，复溶后的储液浓度应根据冻干标准品标签上的标注蛋白量进行计算。
6．标准曲线的制备：
  取8个管，按照标准品浓度依次进行标记，移取880 μ L 1×稀释缓冲液至标记为6000pg/mL的离心管中，其余各管移取500 μ L，根据标准品储液浓度计算6000pg/mL标准品应移取的储液体积，加至离心管中，混匀，取500 μ L至下一标记浓度的离心管中，混匀…进行一系列倍比稀释；6000pg/mL为标准曲线最高点，1×稀释缓冲液为空白(0pg/mL)。每次试验均需制备相应的标准曲线，不同试剂盒以及不同天的标准曲线不能混用。

下图仅用于标准曲线制备范例展示，由于冻干标准品的批次差异，复溶后标准品储液的蛋白浓度不同，应根据实际浓度计算配制标准曲线所需的储液体积。


二、实验步骤：
使用前应将试剂盒的所有组分和待检样本温度恢复到室温。强烈建议所有的标准品和待检样本进行双复孔测定。

1．按前述试剂准备项准备好各种试剂、标准品和待测样本。
2．计算检测样本所需酶标条，将酶标条从铝箔袋取出，剩余的酶标条放回铝箔袋中并封好袋口，低温保存。
3．洗板：用1×洗涤缓冲液(300 μ L/孔)洗板三次，拍干酶标板。洗板对试验结果有重要影响，确保最后一次拍板没有洗液残留。
4．样本孵育：加入标准品和待测样本，100 μ L/孔，确保15分钟内完成点样，室温孵育2小时。
5．洗板：弃去孔中液体，加入1×洗涤缓冲液(300 μ L/孔)洗板三次，拍干酶标板。
6．酶标检测抗体孵育：将预先配制至工作浓度的检测抗体加入酶标板中，100μ L/孔，混匀，室温孵育1小时。
7．洗板：弃去孔中液体，加入1×洗涤缓冲液(300 μ L/孔)洗板三次，拍干酶标板。
8．显色：将预先配制的底物液加入酶标板中，200 μ L/孔，混匀，室温避光孵育20分钟。
9．终止：加入50 μ L/孔终止液至酶标板中，轻轻震动酶标板至显色均匀。
10．读值：20分钟内读取450nm的光吸收值。

三、结果处理：
如果待测样本OD值超出标准曲线最高点OD值，需将样本进行稀释后重新测定。
取标准品、空白对照、样本的平均光吸收值，减去空白对照的平均光吸收值，得到标准品、样品的光吸收校准值。以标准品浓度为横坐标，校准后的标准品光吸收值为纵坐标绘制标准曲线。

多种绘图和统计学软件可以用于辅助绘制标准曲线并进行未知样本浓度的计算。四参数拟合法往往曲线拟合效果较好，但其它方法如线性，双对数法也可能获得较好拟合结果，需要根据具体实验数据进行分析。

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Q20001 新型冠状病毒N蛋白ELISA试剂盒 96T

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Q20001	新型冠状病毒N蛋白ELISA试剂盒	96T