TCLR(exo-) DNA聚合酶

特别提示：包括TCLR(exo-) DNA聚合酶在内，本公司的所有产品仅可用于科研实验，严禁用于临床医疗及其他非科研用途！

产品名称：TCLR(exo-) DNA聚合酶
英文名称：TCLR(exo-) DNA Polymerase
产品货号：MT0133
产品规格：250U|2500U

TCLR(exo-) DNA聚合酶来源于Thermococcus litoralis，经基因工程改造而得，去除了3′→5′核酸外切酶校读活性，其保真度有所降低，大约比Taq DNA聚合酶高2倍。该酶在95℃温育1小时后，仍具有90%以上的聚合酶活性。TCLR(exo-) DNA聚合酶与Vent (exo-) DNA Polymerase性质和使用方法完全相同，纯化自重组E.coli菌株，其携带D141A/E143A突变。本聚合酶主要用于高温环状测序、高温双脱氧测序等方面。

单位定义：
一个活力单位是指在74℃条件下，30分钟内催化10nmol dNTP的掺入反应成为酸不溶性物质所需的酶量。

产品组成：
 

组分	250U	2500U
TCLR(exo-) DNA聚合酶(5U/μl)	50μl	500μl
10×HG PCR Buffer 1	1ml	5ml

储存：-20℃可保存3年。

PCR性能：
以λDNA为模板，扩增5kb DNA片段；
以人类基因组DNA为模板，扩增2kb DNA片段。扩增速度为2kb/min。

使用方法：

按下表配制反应液：
 

成分	用量
TCLR(exo-) DNA聚合酶(5U/μl)	0.25μl
10×HG PCR Buffer 1	5μl
dNTP Mixture (2.5mM each)	4μl
模板DNA	X μl
上游引物（10μM）	2μl
下游引物（10μM）	2μl
ddH2O	up to 50μl

模板DNA用量参数(50μl反应体系)
 

模板DNA(目的片段≤5 kb)	用量
Genomic DNA	100-1000ng
Plasmid DNA	5-30ng
cDNA from RT reaction	1-5μl

PCR程序设置：
 

循环数	温度	时间
1st Cycle	95℃	2min
25-35 Cycles	95℃	10s
	Tm	20s
	72℃	2kb/min
Last Cycle	72℃	2min

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货号	名称	规格
BTN130506	PCR级海藻糖溶液	1.5mL
BTN90805	即用型PCR试剂盒(含染料)	1ml×10|5mL×20
BTN130609	一步式RT-PCR Mix	1mL
BTN131083	Ribo-SPIA cDNA扩增试剂盒	20次
YT377	富含GC PCR Buffer	2ml
WE0143	快速实时荧光定量PCR预混体系(高含量ROX校正染料)	5ml

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名称：PCR抑制物清除剂
货号：BTN60804
规格：1mL
用血液、土壤、植物、中药材等样品中提取的DNA 经常含有会抑制PCR的产物。本产品专门用于解除这些PCR 抑制剂的抑制作用，使DNA 能够用于PCR扩增。

产品特点：
1. 使用简单，直接加入PCR反应体系中使用。
2.适用范围广，可以用于解除血液、土壤、植物、中药材等DNA样品中的PCR 抑制剂。

低温运输，-20℃保存，有效期一年。

使用方法：将本产品按1：10的比例加入到PCR反应体系中即可进行PCR，如果PCR反应体系为50μL，则需要加本产品5μL。

名称：Oligo dT12-18引物(0.5μg/μL)
货号：BTN100814
规格：5μg
Oligo(dT)12-18为长度在12到18之间的Oligo(dT)混合物，可以用于以带polyA尾巴的RNA为模板的第一链cDNA合成。建议每20μL反应体系使用0.5μg oligo(dT)。

储存条件：低温运输和-20℃保存，有效期一年。

名称：PCR Mix(含染料)(滴瓶装)
货号：WE0100
规格：5ml
  本产品以滴瓶包装，集成了PCR反应所需各要素及稳定剂、增强剂，对PCR反应中各成份的浓度有较高的宽容度，无需加样工具，将本产品直接滴入加有模板、引物的PCR管即可完成反应准备。本产品热稳定性高，启封后置2～8℃保存，六个月内可随时取用。本产品使用高度封闭的热启动DNA聚合酶，可有效减少非特异PCR产物扩增，配制PCR反应体系可在室温进行，但须注意热循环程序的第一步必须包括至少10分钟的95℃热启动。本产品已加入染料(蓝色)，反应结束后可直接进行电泳检测。扩增得到的大部分PCR产物3"端附有一个“A”碱基，因此可直接用于T/A克隆。

质量控制：
1、经检验无外源核酸酶活性；
2、PCR方法检测无宿主残余DNA；
3、能有效地扩增多种基因组中的单拷贝基因；2～8℃存放六个月，活性无明显改变。

使用方法：
  本产品以滴瓶包装，使用时，取掉旋盖后将滴瓶倒置，滴塞口对准已加入适量模板和引物的PCR管口上方，以食指和拇指轻轻挤压滴瓶，滴入一滴反应液，即可完成PCR反应准备。正常挤压时，液滴平均体积约为25μl，可能会因挤压滴瓶用力不一，造成挤出液滴体积存在差异，但对多数PCR反应，均可获得良好扩增。

1、PCR反应体系：

 

试剂	反应体积
PCR Mix	1 滴
Forward Primer，10μM	1μl
Reverse Primer，10μM	1μl
Template DNA	≤4μl

注意：
1)引物浓度以10μM作为参考。扩增效率不高的情况下，可提高引物的浓度；发生非特异性反应时，可降低引物浓度，由此优化反应体系。
2)PCR模板的使用量应视DNA性质加以调整。一般而言，在每滴PCR反应中，当模板为质粒DNA时，以1 pg至10ng为宜；当模板为细菌基因组DNA时，以1ng至100ng为宜；当模板为真核生物基因组DNA时，以10ng至300ng为宜。需注意，PCR模板绝非越多越好。过多的模板会对PCR反应产生抑制作用，且容易增高其它抑制物水平，影响扩增效果。

2、PCR反应条件：

 

步骤	温度	时间	循环数
预变性	95℃	10 min
变性	94℃	30 s	30-40个循环
退火	55-65℃	30 s
延伸	72℃	60 s
终延伸	72℃	5 min

注意：
1)产品含有高度封闭热启动DNA聚合酶，须在预变性95℃，10 min条件下实现酶的活化。
2)一般实验中退火温度比扩增引物的熔解温度Tm低5℃，无法得到理想的扩增效率时，适当降低退火温度；发生非特异性反应时，提高退火温度，由此优化反应条件。
3)延伸时间应根据所扩增片段大小设定，本产品的扩增效率为1 kb/min。
4)可根据扩增产物下游应用设定循环数。如循环次数太少，扩增量不足；如循环次数太多，错配机率会增加，非特异性背景严重。所以在保证产物得率的前提下应尽量减少循环次数。

储存条件：-20℃，有效期2年