醋酸检测试剂盒（激酶格式），K-ACETRM

简介：
鉴于其重要性和在食品、饮料和其他材料中的普遍存在，醋酸是测量最多的分析物之一。然而，与其他一些常见的分析物不同，这种酸的传统酶法存在明显的局限性。例如，基于人工乙酰辅酶A合成酶（ACS）的格式的典型特征是使用过程中试剂不稳定、反应时间缓慢、多次试管添加/吸光度读数和复杂的计算。虽然Megazyme最近开发的先进醋酸试剂盒（K-ACET）克服了与手动重建ACS相关的关键稳定性问题，但该测定的整体格式仍然相对不便，需要添加多个试管和耗时的数据记录/处理。因此，Megazyme开发了基于乙酸激酶（AK）和磷酸转乙酰酶（PTA）的当前试剂盒（K-ACETRM），专门用于克服采用手动检测程序的分析员所遇到的这些局限性。与基于ACS的试剂盒不同，该产品快速（约4分钟），不存在试剂稳定性问题，易于操作，具有扩展的线性，并且随着乙酸浓度的增加，吸光度化学计量会发生变化（即不需要复杂的方程，原始吸光率数据的处理方式与大多数其他酶试剂盒一样）。与其他Megazyme醋酸试剂盒一样，K-ACETRM在使用过程中也具有>2年的稳定性，因为关键酶成分是以即用型硫酸铵悬浮液的形式提供的。聚乙烯吡咯烷酮（PVP）也被纳入检测系统，以防止葡萄酒（尤其是红葡萄酒）中发现的特定单宁的干扰。由于所用缓冲系统的pH值（7.4）明显低于传统的基于ACS的试剂盒（8.4），因此自发酯水解（引起蠕变反应）的干扰也被最小化。
原理：
在ATP存在下，乙酸激酶（AK）将乙酸（醋酸盐）转化为乙酰磷酸和腺苷-5'-二磷酸（ADP）（1）。
                         （AK）
（1） 醋酸+ATP——>乙酰磷酸酯+ADP
在辅酶A（CoA）存在下，磷酸转乙酰酶（PTA）的作用使乙酰磷酸酯产物快速转化为乙酰辅酶A和无机磷酸盐，从而显著加速了该反应（2）。
                           （PTA）
（2） 乙酰磷酸+Co——>A乙酰CoA+Pi
在丙酮酸激酶（PK）存在下，磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）将（1）中形成的ADP重新转化为ATP和丙酮酸（3）。
                        （PK）
（3） ADP+PEP——>丙酮酸+ATP
在D-乳酸脱氢酶（D-LDH）存在的情况下，丙酮酸被还原的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）还原为D-乳酸，并产生NAD⁺（4）。
                              （D-LDH）
（4） 丙酮酸+NADH⁺——>H+D-乳酸+NAD⁺
在上述反应途径中形成的NAD+的量与乙酸的量是化学计量的。NADH消耗量是通过340nm处吸光度的降低来测量的。
规格：72次测定（手动）/720次测定（微孔板）
分析物：醋酸
检测形式：分光光度计、微孔板
检测方法：吸光度
波长（nm）：340
信号响应：降低
线性范围：每次测定0.3至25µg乙酸
检测限：0.254 mg/L
反应时间（分钟）：~4分钟
应用示例：葡萄酒、啤酒、水果和果汁、软饮料、醋、蔬菜、泡菜、乳制品（如奶酪）、肉类、鱼类、面包、烘焙产品（和烘焙剂）、番茄酱、酱油、蛋黄酱、调味品、纸张（和纸板）、茶、药品（如输液）、饲料和其他材料（如生物培养物、样品等）。
方法识别：改进方法
试剂盒组成：
套件：
Megazyme提供适用于手动形式72次测定（或微孔板形式720次测定）的试剂盒。试剂盒包含完整的检测方法以及：
瓶1：缓冲液（24 mL，pH 7.4）和叠氮化钠（0.02%w/v）作为防腐剂。
在4°C下稳定2年以上。
瓶2：NADH、ATP、PEP和PVP。冻干粉。在-10°C以下稳定2年以上。
瓶3：（x2）辅酶A，冻干粉。在-10°C以下稳定2年以上。
瓶4: D-乳酸脱氢酶、磷酸转乙酰酶和丙酮酸激酶悬浮液（1.5mL）。在4°C下稳定2年以上。
瓶5：乙酸激酶悬浮液（1.5 mL）。在4°C下稳定2年以上。
瓶6：醋酸标准溶液（5 mL，0.10 mg/mL）。稳定2年以上；在4°C下密封储存。
详见》http://equl.cn/goods.php?id=114