􀂙 产品介绍：
大肠杆菌DH10 Bac感受态细胞是经特殊工艺制备的，适用于昆虫杆状病毒Bac-to-Bac系统中同源重组的菌株，用于产生重组Bacmid。使用pUC19 质粒检测，转化效率可达107CFU/ug，-70°C 保存几个月转化效率不发生改变。
DH10Bac菌株的基因型为：F- mcrA Δ(mrr-hsdRMS-mcrBC) φ80lacZΔM15 ΔlacX74 recA1 endA1 araD139 Δ (ara,
leu)7697 galU galK λ- rpsL nupG /pMON14272 / pMON7124

􀂙 产品特点：
DH10Bac 细胞包含亲本Bacmid bMON14272 和辅助质粒 pMON7124. 亲本Bacmid 包含一个mini-F 复制子、卡那霉素抗性基因、att Tn7 位点和lac Zα-互补因子。辅助质粒包含tns ABCD 区域，该区域提供了mini-Tn7从供体质粒插入亲本Bacmid 靶位点所需要的转座蛋白。供体如pFastBac 系列质粒（pFastBac1，pFastBacDual等）含有Tn7R 和Tn7L 同源重组臂，Tn7R 和Tn7L 之间包含庆大霉素抗性基因、昆虫病毒多角体基因启动子、多克隆位点和SV40 病毒的PolyA 加尾信号。当含有靶基因pFastBac 的重组质粒转化到DH10Bac 细胞后，发生重组后就可产生重组Bacmid，提取纯化重组Bacmid 转染昆虫细胞Sf9 或Sf21 就可以包装产生昆虫病毒。
此外，DH10Bac 细胞中的The φ80dlacZDM15 基因的产物可以实现β-半乳糖苷酶的α-互补现象，用于重组bacmid 的蓝白斑筛选。

􀂙 操作步骤（以下操作均按无菌条件的标准进行）：
提示：
       感受态细胞应保存在－70℃ ，不可多次冻融和放置时间过长，以避免降低感受态细胞的转化效率。
制备含下面抗生素的LB 固体平板：50 μg/ml kanamycin、7 μg/ml gentamicin、10 μg/ml tetracycline、100 μg/ml X-gal、40 μg/ml IPTG。
1. 取感受态细胞置于冰浴中，如需分装可将刚融化细胞悬液分装到无菌预冷的离心管中，置于冰浴中。
    一次转化感受态细胞的建议用量为50-100μl，可以根据实际情况分装使用。应注意所用DNA 体积不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100μl 感受态细胞为例。
2. 向感受态细胞悬液中加入1-10ng 重组质粒，轻轻旋转离心管以混匀内容物，在冰浴中静置30 分钟。
3. 将离心管置于42 ℃ 水浴中放置90 秒，然后快速将管转移到冰浴中，使细胞冷却2 分钟，该过程不要
摇动离心管。
4. 向每个离心管中加入900μl无菌的SOC（不含抗生素），混匀后置于37 ℃ 200rpm，摇床振荡培养4 小
时。
5. 用SOC 培养基进行10 倍梯度稀释，如分成3 个稀释梯度10-1, 10-2, 10-3
6. 取100ul 的各个梯度的培养物用于涂布。等平板中的液体完全吸收后，倒置平板，37℃培养24-48 小时。
7. 保留剩余的菌液于4℃冰箱中，视平板上菌落生长情况决定去留。
* 相关试剂及培养基的制备方法
1. SOB 和SOC 培养基：称取20g Tryptone ，5g Yeast Extract ，0.5g NaCl 置于1L 烧杯中加入约800ml 的去离子水，完全溶解后再补加10ml 250 mM KCl 溶液，滴加5M NaOH（约0.2ml）调pH 值7.0。 加入去离子水将培养基定容至1L。121 灭菌20min。使用时加入5ml 灭菌的2M MgCl2 溶液（此种培养基称为
SOB）。再补加经0.22um 过滤除菌的1M 葡萄糖溶液2ml（此种培养基为SOC）。
2. 转化复苏细菌用的液体SOC 培养基：可以一次高压50ml 液体培养基，无菌状态按1ml 每管分装于高压灭菌的1.5ml 离心管中，装于自封袋中，冻存于-20℃中，每次用一支。可以极大地避免培养基污染和减少劳动量。
3. LB 固体选择培养基：100ml LB 液体培养基中加入1.5 g 琼脂粉，摇匀后，121℃高压灭菌20 分钟。冷却至50℃左右时加入相应浓度的抗生素（如AMP 浓度通常为100ug/ml），混匀后倒在细菌用的无菌培养中，等琼脂凝固后即可使用。
4. IPTG：称量1.9g IPTG（MW=238.31）充分溶解于40 ml 灭菌水，浓度为200mmol/L。用无菌0.22 μm
过滤膜过滤除菌。小份分装后，-20℃保存。
5. X-gal：用DMF（二甲基甲酰胺）配制成20 mg/ml，小份分装（1 ml/份）后，-20℃避光保存。

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