25羟维生素D ELISA

25-OH维生素D(总)检测试剂盒（酶联免疫法）
 
通用名称：25-OH 维生素D(总)检测试剂盒（酶联免疫法）
英文名称：25-OH Vitamin D (total) ELISA

25-OH维生素D(总)检测试剂盒预期用途
25-OH维生素D(总)检测试剂盒用于血清和血浆中总25-OH维生素D（维生素D2和维生素D3）的定量检测。

25-OH维生素D(总)检测试剂盒检测原理

25-OH维生素D(总)检测试剂盒基于竞争酶联免疫法首先，由于体内多数循环25-OH VD 束缚于VDBP，因此结合样本需先经过变性缓冲液的预处理来提取分析物；中和反应后，生物素化的25-OH VD（酶联物）与过氧化物酶标记的链霉亲和素加入，混匀，加入微孔板内，样本中的内源性25-OH VD与25-OH VD-生物素酶联物竞争结合包被板上包被的VDBP，结合的生物素化的25-OH VD由过氧化物酶标记的链霉亲和素检测，孵育，洗板，除去未结合的成分，加入底物液发生颜色反应，一定的时间后加入终止液；颜色强度与样本中的25-OH VD浓度成反比。

25-OH维生素D(总)检测试剂盒组成成分
1. 包被板，96孔，可拆，包被了维生素D结合蛋白（VDBG）
2. 标准品（0-5），6瓶，1ml，即用，浓度：0-4-10-25-60-130pg/ml；转换：1 ng/mL = 2.5 nmol/L.标准品根据NIST SRM校准；含无汞防腐剂
3. 高低质控，2瓶，1ml，即用，质控品具体数值及范围见QC指控单，含无汞防腐剂
4. 变性缓冲液，1瓶，10ml，即用
5. 中和缓冲液，1瓶，25ml，即用，含无汞防腐剂
6. 酶联物，1瓶，7ml，即用，生物素化维他命D3，含无汞防腐剂
7. 酶联复合物，1瓶，7ml，即用，链霉亲和素-过氧化物酶，含无汞防腐剂
8. 底物液，1瓶，25ml，即用，TMB
9. 终止液，1瓶，14ml，即用，含0.5M的硫酸
10. 洗涤液，1瓶，30ml，40倍浓缩
11. 封板纸，1块

25-OH维生素D(总)检测试剂盒实验所需材料但试剂盒未提供
1. 用于维生素D释放的玻璃瓶
2. 孵箱37℃
3. 酶标仪（450±10nm）
4. 校准的移液器
5. 吸水纸
6. 去离子水或双蒸水
7. 计时器
8. 半对数坐标纸或数据处理软件

25-OH维生素D(总)检测试剂盒检测步骤
1. 按照要求将工作酶溶液配制好
2. 将试验所需的玻璃瓶或未包被的包被板固定好
3. 每玻璃瓶加25μl的标准品，质控和样本，每次加样更换新枪头
4. 每玻璃瓶加50μl的变性缓冲液
5. 盖上盖子，37℃下孵育30min
6. 每玻璃瓶加200μl的中和缓冲液
7. 每玻璃瓶加100μl的工作酶溶液
8. 充分混合10秒，充分混合这一步相当重要；然后吸取150μl 此混合溶液用于ELISA试验

ELISA 步骤
9. 将实验所需板条固定于板架上
10. 加150μl上述已预处理的标准品，质控品和样本于相应的微孔内
11. 盖板，37℃下孵育60min
12. 弃去孔内反应液，每孔加300μl的洗涤液洗板4次，吸水纸上拍干
  注意：试验的灵敏度和精确度与洗板是否彻底紧密相关
13. 每孔加150μl的底物液
14. 室温下孵育15min
15. 每孔加100μl的终止液
16. 加完终止液后10min内在酶标仪450±10nm处读数