Pfu DNA Polymerase--性能参数，报价/价格，图片

基本信息

产品名称：

Pfu DNA Polymerase

英文名称：

Pfu DNA Polymerase

国产/进口：

国产

产地/品牌：

深圳/HYK

型号：

EN1002

参考报价：

询价

销售商：

深圳华因康基因科技有限公司

总点击数：

1449

更新日期：

2013-07-05

产品类别：

分子生物学试剂

性能参数

概述
本酶是一种高保真的耐热性DNA聚合酶，其保真度是Taq DNA聚合酶的8~10倍。该酶不仅具有5′-3′DNA聚合酶活性，还具有3′-5′核酸外切酶校对活性，能及时切除DNA合成链中碱基错配的核苷酸，大大增加了碱基配对的正确率，保证了DNA合成的高度忠实性。该酶不具有5′-3′核酸外切酶活性。

应用

1.高保真PCR (high fidelity PCR)、点突变、双平端PCR克隆。

2.该酶扩增出来的DN**断为双平端，可用于双平端克隆，不能用于常规T载体克隆。

3.dUTP和dITP或含有dUTP和dITP的引物不能用于该酶介导的PCR扩增反应。

来源
        含有来自Pyrococcus furiosus.的Pfu DNA polymeras基因的E.coli。

活性单位定义
        以小牛胸腺DNA为模板，在72℃反应30min，能催化10nmol的dNTP聚合为多核苷酸片段的酶量定义为1个活性单位（U）。

贮存条件
        20 mMTris-HCl (PH8.0)，100 mMKCl，0.1 mMEDTA，0.1 % NP-40 (v/v)，0.1 % Tween-20 (v/v)，1 mMDTT，50 %甘油（v/v），-20°C贮存。

10×Pfu Buffer（with Mg²⁺）
        200 mMTris-HCl (PH 8.8)
        20 mMMgSO₄
        100 mMKCl
        100 mM(NH₄) ₂SO₄
        1% Triton X-100
        1 mg/ml nuclease-free BSA

常规PCR反应条件
       一.室温融化反应所需溶液后涡旋混匀并短暂离心至管底，连同PfuDNA聚合酶置于冰上。
       二.按下表依次加入如下组分

ddH₂O（nuclease-free）	变量
10×Pfu Buffer（With Mg²⁺）	5µl
dNTP Mix（10mMeach）	1µl
Forward primer	0.1~1.0µM
Reverse primer	0.1~1.0µM
Template DNA	50pg~1µg
Pfu DNA polymerase	1.25U~2.5U
总体积	50µl

ddH₂O（nuclease-free）	变量
10×Pfu Buffer（With Mg²⁺）	5µl
dNTP Mix（10mMeach）	1µl
Forward primer	0.1~1.0µM
Reverse primer	0.1~1.0µM
Template DNA	50pg~1µg
Pfu DNA polymerase	1.25U~2.5U
总体积	50µl

注：①50μl PCR反应体系中模板DNA推荐使用量

人类基因组DNA	50~500ng
大肠杆菌基因组DNA	5~50ng
λDNA	0.5~10ng
质粒DNA	0.1~5ng

② 可以使用不含Mg²⁺的反应Buffer,并根据需要自行添加MgSO₄达到Mg²⁺的最适反应浓度。
三.轻轻振荡混匀反应液并短暂离心，如果PCR仪没有热盖可加入一半体积的矿物油。
四.将PCR管放入PCR仪中，设置并运行PCR反应条件可参考下表：

步骤	温度	时间	循环次数
预变性	94℃	3~5min	1
变性	94℃	30s	25~35
退火	Tm-5℃	30s
延伸	72℃	2min/kb
最后延伸	72℃	5~15min	1

注：PCR反应条件视模板、引物等结构条件不同而各异，在具体操作中需要根据模板类型、目的片段大小、扩增片段的碱基序列和引物的GC含量及长短等具体情况来设计最佳的反应条件，包括退火温度，延伸时间等。

质量控制

纯度检测：经SDS-PAGE检测纯度大于95%。

核酸酶检测：40units Pfu DNA聚合酶与1μg线形DNA在1×Pfu buffer中37℃共同孵育16h，0.8%琼脂糖电泳检测。DNA没有出现降解表示通过该项检测。

       大肠杆菌DNA污染检测： PCR 产物：544 bp。
         Forward primer：5-GGAAGAAGCTTGCTTCTTTGCTGAC-3
         Reverse primer：5-AGCCCGGGGATTTCACATCTGACTTA-3
         PCR程序：94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min
         0.8%琼脂糖电泳检测没有544bp产物出现，表明通过该项检测。
        质粒污染检测：
         T7 Promoter Primer：5’-TAATACGACTCACTATAGGGAGA-3
         T7 terminator Primer：5’-TATGCTAGTTATTGCTCAG-3
         PCR程序：94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min
         0.8%琼脂糖电泳检测没有PCR产物条带出现，表明通过该项检测。
        支原体污染检测：
         PCR产物：717 bp
         GPO-1 ：5’-ACTCCTACGGGAGGCAGCAGTA-3
         MGSO ：5’-TGCACCATCTGTCACTCTGTTAACCTC-3
         PCR程序：94°C, 3 min; 35 cycles( 94°C, 30 sec; 55°C, 30 sec; 72°C, 45 sec); 72°C, 7 min
         0.8%琼脂糖电泳检测没有PCR产物条带出现，表明通过该项检测。

公司简介

华因康基因（集团）成立于2008年，由入选中组部首批“千人计划”的国家海外高层次人才、国家特聘专家团队创立。集团秉承“专业、严谨、创新、服务”的经营理念，致力于中华民族健康事业，成为以基因技术为核心，拥有雄厚技术支撑，具备研发、生产和应用完整产业链的生命科技领域国家级高新技术企业集团。

公司的宗旨：探索基因信息，提高生命价值，并致力培养一批生命科学领域以基因生物研究为基础的研发和应用的尖端人才；不断创新核心产品，促进基因生物产业化的快速发展。

公司的核心技术：涉及生物物理、生物化学、生物信息、电子工程、表面化学、光学工程和五金机械等专业理论。目前已申请100多项外发明专利，35项计算机软件著作权，37个商标。已完成高通量基因测序仪企业标准在国家标准委备案，同时也完成基因测序系统科技成果鉴定，其产品未来具有广泛的市场前景。

公司成立以来，在国家有关部委、中科院、广东省和深圳市政府及有关高校、科研机构的热情关注和大力支持下，公司荣获“广东省重点引进海外创新科研团队”、深圳市南山区“创业之星”大赛冠军、国务院侨办“重点华人华侨企业创业团队”等十多项荣誉称号，公司也是广东省科技部教育部产学研重点示范基地，国家“博士后工作站”，两名博士入选首批国家引进海外高层次人才“千人计划”，得到了国家领导人的亲切关怀和鼓励，公司核心产品高通量基因测序仪也于2010年被认定为国家重点新产品。

公司秉承“探索基因信息，提高生命价值”的理念，以中华民族健康事业为己任，与国内顶级医院及科研机构携手，开拓高通量基因测序技术在生命科学与健康医疗领域中的广阔应用，为人类的健康事业提供专业、贴心的个性化服务。

作为生物技术战略新兴产业，我们将依靠科学、脚踏实地、再接再厉，不断创造新的业绩。

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