血液多核白细胞分离试剂盒

血液多核白细胞分离试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

YIJI血液多核白细胞分离试剂是一种旨在通过聚糖和泛影葡胺混合液，达到特定比重，然后离心分层以获得纯化完整的多核白细胞的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。可以被用于多核白细胞细胞的分离、鉴定、染色、标记、培养、DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测定和细胞流式仪分析等研究。产品严格无菌，即到即用，操作简易，分离出色，性能稳定，细胞活性保证。

技术背景

全血溶液含有血清、各种蛋白因子、无核血红细胞、血小板、多核白细胞和单核白细胞等。为了获得纯化完整的多核白细胞，采用English和Adersen（1974）的比重（1.119克/毫升）离心技术，可以方便快速地从全血和骨髓中分离。

产品内容

YIJI高比重液（Reagent A）     30毫升

YIJI低比重液（Reagent B）     30毫升

产品说明书   1份

保存方式

保存在4℃冰箱里，有效保证6月

用户自备

PBS缓冲溶液（GMS12033）：用于清洗多核白细胞

白细胞完全培养液（GMS12052.1）：用于分离后白细胞的培养

白细胞冻存液（GMS10001.2）：用于分离后白细胞的长期保存

15毫升锥形离心管：用于细胞分离操作的容器

50毫升锥形离心管：用于细胞清洗操作的容器

2毫升无菌塑料吸管：用于抽吸多核白细胞层液体

台式离心机：用于沉淀细胞

实验步骤

实验开始前，室温预热试剂溶液。然后进行下列操作。

• 准备1个无菌的15毫升锥形离心管
• 加入3毫升YIJI高比重液（Reagent A）
• 小心沿着管壁，接近YIJI高比重液（Reagent A）层面，非常缓慢地加入3毫升YIJI低比重液（Reagent B）
• 小心沿着管壁，接近YIJI低比重液（Reagent B）层面，非常缓慢地加入6毫升新鲜的EDTA抗凝的全血样品在YIJI低比重液（Reagent B）上面（注意：切记不要搅浑YIJI低比重液（Reagent B））
• 室温下（25℃），小心放进台式离心机离心30分钟，速度为700g（注意：离心机设置加速和制动均为零）
• 小心取出离心管，切记不要震动
• 可见：最上层为血浆（为淡红色通明），其次为单核白细胞（为薄薄的致密白色环状层），然后为低比重液层，再下为多核白细胞（为薄薄的致密白色环状层），底层之上为高比重液层，最后为红色沉淀在管底的红细胞层
• 小心抽掉多核白细胞的白色环状层以上三分之二液体，切记不要搅动多核白细胞白色环状层
• 用2毫升无菌塑料吸管小心吸取多核白细胞白色环状层液体（0.5毫升）
• 移入到新的无菌的50毫升锥形离心管
• 加入48毫升用户自备的PBS缓冲溶液
• 轻柔上下倾倒混匀
• 放进台式离心机离心10分钟，速度为200g
• 小心倒掉上清液
• 用手指轻弹离心管2至3下，使白细胞颗粒群松动
• （选择步骤）加入5毫升用户自备的白细胞完全培养液，进行细胞培养
• （选择步骤）或加入1毫升用户自备的白细胞冻存液，放进－80℃冻存
• （选择步骤）或即刻进行各种后续实验（包括多核白细胞分离、鉴定、染色、标记、DNA萃取、线粒体分离、细胞因子测定和细胞流式仪分析等）

注意事项

• 本产品为10次操作（6毫升全血/次）
• 所有操作均须无菌状态下进行
• 操作时，须戴手套
• 操作时，在室温下进行
• 使用时，切莫污染母液
• 建议使用新鲜全血
• 全血样品采集须使用血液抗凝液 （参见订购信息）
• 如果血液出现凝块，不宜进行分离操作
• 全血样品和YIJI高比重液（Reagent A）与YIJI低比重液（Reagent B）相加的使用比例为1：1，即2毫升全血，加1毫升YIJI高比重液（Reagent A）和1毫升YIJI低比重液（Reagent B）；如需要增加或减少全血量，则按比例相应增加或减少YIJI高比重液（Reagent A）与YIJI低比重液（Reagent B）
• 本产品细胞回收率70％以上，细胞存活率98％以上
• 本公司提供系列血液研究试剂产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定分离细胞活性保证