新型支原体预防&去除试剂Cellmaxin plus
支原体是一类无细胞壁，形态呈高度多形性，可为圆形、丝状或梨形，其直径仅有0.13～0.18μm，并且变形能力大，故能通过滤菌器。需要指出的是，只要有一个具有增殖能力的支原体就能引起培养体系的污染。细胞培养中的急性污染往往容易觉察，而支原体则像慢性毒药一般，杀细胞于无形中。除了非常有经验的实验员，很多实验员都觉察不到支原体的污染。据统计，超过25%的细胞系中感染了支原体，而研究者并不知晓。支原体污染一般来源于血清，实验仪器、培养基或其他试剂蔓延开来。怎样预防和去除支原体污染呢？是否有一种试剂可以同时预防支原体，细菌，真菌的污染呢？
美国GenDEPOT 推出新型的抗生素制剂Cellmaxin。Cellmaxin是一种新型抗生素制剂，是专门保护细胞培养系统预防和防治支原体（mycoplasma）和细菌污染。Cellmaxin Plus 是在Cellmaxin的基础上添加了抗真菌成分，三效合一，有效的防治支原体、G-阴性菌、G+阳性菌和真菌，抗性范围更广，不需要额外添加青霉素、链霉素及氨苄霉素等。
表1. Gendepot细胞培养用相关抗生素产品
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产品名称 |
货号 |
规格 |
抗菌谱 |
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Cellmaxin Plus，10.5mg/ml |
C3319-006 |
6x1ml |
支原体/革兰氏阳性/革兰氏阴性细菌/真菌 |
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C3319-020 |
20ml |
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Cellmaxin, 10mg/ml |
C3314-006 |
6x1ml |
支原体/革兰氏阳性/革兰氏阴性细菌 |
|
C3314-020 |
20ml |
Ø 含有两种有效成分，去除更彻底。
Cellmaxin显著效果有赖于两种独特的抗菌成份。即大环内脂类和喹诺酮类物质，四环素和大环内酯能结合30S和50S核糖体亚基，从而抑制蛋白质合成，喹诺酮抑制DNA旋转酶。因此可以在细菌DNA复制及蛋白质合成两个层面上抑制细菌生长，明显增强除菌效果。
表2. Cellmaxin Plus与其他同类进口支原体（A,B,C,D）去除试剂的比较
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名称 |
Cellmaxin Plus |
A |
B |
C |
D |
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有效成分 |
大环内脂类、 喹诺酮类 |
泰妙菌素 二甲胺四环素 |
泰妙菌素 二甲胺四环素弗诺喹酮类 |
喹诺酮类衍生物 |
大环内脂类、 喹诺酮类 |
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有效浓度 |
5ug/ml |
BM-Cyclin 1: 10ug/ml BM-Cyclin 2: 5ug/ml |
1ml/100ml medium |
0.5ug/ml |
12.5～37.5ug/ml,一般使用25ug/ml |
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作用时间 |
一次加入2周 |
两种两次2周 |
三种试剂，分3次加，循环使用 |
1-2周
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2周 |
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去除效果 |
92% |
84% |
90% |
64% |
- |
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抗性支原体 |
2% |
5% |
- |
22% |
- |
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产品总量 |
6ml(（10mg/ml） |
BM-Cyclin 1: 25mg BM-Cyclin 2: 12.5mg |
100 x 10ml |
5ml(50 ug/ml) |
2x 1ml （25mg/ml） |
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细胞毒性 |
低毒/无毒 |
+ |
+/- |
+/- |
+/- |
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可否预防支原体污染 |
可以 |
不确定 |
不确定 |
可以 |
不可以，另配预防试剂 |
Ø 无反复感染
同时喹诺酮可以自由的穿透哺乳动物细胞，可以同时除去游离形式的及真核细胞内部的支原体细菌，这个特点保证了经过Cellmaxin处理的细胞不会被支原体感染细胞中释放出的支原体反复感染。因此可以避免除菌后细胞内支原体的反复感染。
表3. 哺乳动物细胞培养常用抗生素比较
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试剂 |
抗菌谱 |
抑菌机理 |
实验用量 |
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Cellmaxin, 10mg/ml |
支原体/革兰氏阳性/革兰氏阴性细菌 |
蛋白合成/DNA合成 |
250ul-1ml/500ml |
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Cellmaxin, Plus 10mg/ml |
支原体/革兰氏阳性/革兰氏阴性细菌/真菌 |
蛋白合成/DNA合成/膜蛋白酶 |
250ul-1ml/500ml |
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Penicillia-Streptomycin |
革兰氏阳性/革兰氏阴性菌 |
细胞壁合成/蛋白合成 |
5ml/500ml |
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Antibiotics-Antimycotisc(100×) |
革兰氏阳性/革兰氏阴性菌/真菌 |
细胞壁合成/蛋白合成/细胞膜 |
5ml/500ml |
Ø 无获得性抗性
由于其优越的除菌机制，避免了抗性支原体的产生。
表4.常用抗支原体试剂比较
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名称 |
处理周期 |
（去除）效果 |
抗性菌株 |
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Cellmaxin |
2周 |
92% cured |
2% |
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BM-Cyclin 1/2 |
2周 |
84% cured |
5% |
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Ciprofloxacin |
12-20days |
77% cured |
14% |
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MRA |
1-2周 |
64% cured |
22% |
Ø 使用方便，作用周期短
可以直接加入到培养基中，避免了两类抗生素的分次及循环使用，提高使用效率；维持2周即可彻底去除支原体。
Ø 广谱除菌效果
对细菌的污染同样有效，低浓度时对革兰氏阴性及阳性细菌均有抑制作用
Ø 作用浓度低，细胞毒性小
10μg/ml可有效处理大部分细菌菌株和部分支原体；一般 5-20μg/ml处理支原体、细菌等，对正常真核细胞代谢不存在明显的毒副作用
表5.Cellmaxin Plus去除&预防支原体用量
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Cellmaxin Plus 支原体去除（20ug/ml ） |
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培养皿尺寸 |
35mm plate |
60mm plate |
100mm plate |
100ml flask |
500ml flask |
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培养基体积 |
2ml |
5ml |
10ml |
100ml |
500ml |
|
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Cellmaxin Plus 体积 |
4ul |
10ul |
20ul |
200ul |
1ml |
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Cellmaxin Plus 支原体预防（5ug/ml ） |
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培养皿尺寸 |
35mm plate |
60mm plate |
100mm plate |
100ml flask |
500ml flask |
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|
培养基体积 |
2ml |
5ml |
10ml |
100ml |
500ml |
|
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Cellmaxin Plus 体积 |
1ul |
2.5ul |
5ul |
50ul |
250ul |
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