呕吐毒素ELISA酶联免疫试剂盒

呕吐毒素ELISA酶联免疫试剂盒
生产商：美国clover公司  总经销商：北京中检维康生物技术有限公司

引言：
呕吐毒素（DON即脱氧雪腐镰刀菌烯醇）是单端孢霉稀族真菌毒素中一种分子量较小的代谢物，是由各种镰刀菌，尤其是F. graminearum产生的。这些霉菌广泛存在，可以感染大麦、小麦、玉米。呕吐毒素具有很高的毒性，会造成免疫功能的混乱，特别是导致猪拒食、呕吐。呕吐毒素试剂盒的工作原理是竞争性酶联免疫分析法，主要用于定量地检测大麦、小麦、玉米等粮食、极其制品和饲料中呕吐毒素含量。

试验方法的原理
呕吐毒素试剂盒的工作原理是固相直接竞争性酶联免疫分析法。呕吐毒素特异性抗体包被在酶标板的小孔中。用蒸馏水或者去离子水将磨细的样品中的呕吐毒素提取出来。标准品和提取的样品与呕吐毒素HRP酶标记物混合，然后一起加入到包被有呕吐毒素特异性抗体酶标板的小孔中。样品中呕吐毒素和HRP标记的呕吐毒素与小孔中的抗体进行竞争性反应。通过清洗，将小孔中未反应的物质洗掉。加入酶底物溶液(TMB)，结果产生兰色。颜色强度与结合的酶标记物的量成正比，与样品或者标准溶液中呕吐毒素的量成反比。加入酸性停止液，终止颜色反应，蓝色变成黄色。用酶标仪在450nm处测定光密度值，将样品的光密度与标准溶液的光密度相比较，即可求出样品中呕吐毒素的含量。

注意事项：
为了保证测定结果的可靠性，请按照下列良好实验室操作规范（GLP）进行实验
1． 在进行分析操作之前，请将所有的试剂回温到室温(20-25°C)。
2． 试剂储藏在2- 8°C，不要使过期的试剂，试剂永远不要冷冻。
3． 不要使用混浊或沉淀的溶液。
4． 不要将未使用完的试剂重新到回到试剂瓶中。每次添加的试剂量严格符合说明书。
5． 分析操作的温度和时间严格符合说明书。
6． 分析的样品pH为7.0 (±1.0)。过酸、过碱性均会影响测定结果。
7． 不要用嘴吸样品和标准品。
8． 停止液是酸性的，与皮肤和眼睛接触。如果接触了，请用大量的水进行清洗。
9． 因为所以的试剂、容器、设备接触到样品和标准溶液，可能含有呕吐毒素，所以，试验人员必须带防护手套和眼镜。
10． 所有用过的试剂、容器、设备，需丢弃的应该放入专门的垃圾筒中。

试剂盒中组成：

1. 包被有抗抗体的96微孔板：1块（96 孔，12 条×8 孔）

1. 呕吐毒素标准品：0 ng/ml 、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、200ng/ml            1 瓶 × 1.0ml
2. DON抗体：              1 瓶 × 10ml
3. DON酶标抗原：           1 瓶 × 10ml
4. 10× 浓缩洗涤液：         1 瓶 × 50ml
5. DON稀释缓冲液A：        1 瓶 × 50ml
6. DON稀释缓冲液B：        1 瓶 × 50ml
7. 显色底物TMB：           1 瓶 × 17ml
8. 终止液：                 1 瓶 × 7ml
9. 试剂盒说明书：           1份
10. 质检报告：               1份

注意事项

1）室温低于20℃或试剂及样品未回到室温（20- 25℃）会导致数值偏低。

2）在洗板过程中如果出现板孔干燥过久的情况，则会出现标准曲线不成线性，重复性不好的现象。所以洗板排干后应立即进行下一步操作。

3）标准物质和显色液对光敏感，避免直接暴露在光线下。

4）混合要均匀，洗板要彻底（包括加样品和标准液的时候都必需充分混合均匀）。

5）终止液为强酸性物质，避免接触皮肤。

6）不要使用过了有效期的试剂盒，也不要混合使用不同批次的试剂盒，这样会引起测定结果不准确。

1. 试剂盒的储存条件是2-8℃，切勿冷冻。

9.  试剂盒的性能指标

1）检测限LOD: 谷物0.15ppm（mg/kg），饲料0.25ppm（mg/kg），发酵液0.15ppm（mg/kg）。（LOD：空白样品测定值+2倍标准偏差SD）

2）定量限LOQ: 谷物0.25ppm（mg/kg），饲料0.5ppm（mg/kg），发酵液0.25ppm（mg/kg）。

3）定量检测范围：谷物0.25-5.0ppm，饲料0.5-10.0ppm，发酵液0.25-5.0ppm。

还有其他毒素类试剂盒，欢迎来电咨询13366849880