产品介绍

TrypLE™ Select CTS™ 是由微生物发酵获得的一种重组酶，可用作猪胰蛋白酶的非动物来源替代品。在从研究应用向临床应用过渡的过程中，GIBCO™ CTS™ 产品系列能够减少试剂验证方面的负担。
 
• 在从研究向临床应用的过渡过程中，GIBCO™ TrypLE™ Select ™ CTS™ 能够减少试剂验证方面的负担。
• 非动物或人源性
• 降低病毒或朊病毒污染的风险
• 清除动力学及恢复活力可与猪胰蛋白酶媲美
• 对多种细胞系具有活性，包括强附着细胞系
• 室温下（15 至 30°C）可保持稳定长达 24 个月。
• 使用专用的高压灭菌或一次性设备生产。
 
TrypLE™ Select CTS™ 是由微生物发酵获得的一种重组酶，可用作猪胰蛋白酶的非动物来源替代品。该材料用于从塑料器具中解离附着依赖性细胞系。无论在不含血清还是添加血清的培养系统中，TrypLE Select 都能够解离培养的细胞。该产品以 1X 储备液形式提供，使用 DPBS 配制而成，包含 1 mM EDTA。这种 rProtease 的浓度是Invitrogen Corp. 的专有技术。
 
GIBCO™ CTS™ 产品质量优异，并附有相应的证明文件，如质检证明、原产地证明，可获取药品主文件授权许可证。在从科研向临床应用过渡时，GIBCO™ CTS™ 全线产品能够减少试剂验证方面的负担。
 
适用于研究用途或细胞、基因或组织相关产品的生产。注意：不适用于向人或动物进行直接给药
 
使用步骤

1.准备工作:
预热： 将 CTS™ TrypLE™ Select 酶和必要的缓冲液（如 DPBS, D-PBS without Ca²⁺/Mg²⁺）或培养基置于 37°C 水浴或培养箱中预热约 15-30 分钟。避免反复冻融，解冻后建议分装并储存于 -5°C 至 -20°C。使用前确保酶液澄清，无沉淀或浑浊。
平衡： 将需要解离的细胞培养容器（如培养瓶、培养皿、多层培养器）从培养箱中取出，静置片刻使其温度接近室温或 37°C（操作时动作要快，避免细胞长时间处于非最适温度）。
试剂准备： 准备好预热好的 含血清的完全培养基（或其他含有蛋白酶抑制剂的合适溶液，如 CTS™ TrypLE™ Select 终止液）用于中和酶活性，以及无菌的移液管、离心管等。

2.移除培养液:
无菌操作下，小心吸弃或抽吸掉细胞培养容器中的旧培养基。这一步去除血清（含蛋白酶抑制剂）对后续酶解离的干扰。

3洗涤细胞 (可选但推荐):
向容器中加入少量（足以覆盖细胞层即可，例如 T-75 瓶加 5-10ml）预热的 DPBS (不含 Ca²⁺/Mg²⁺) 或其他合适的平衡盐溶液（如 HBSS）。
轻轻摇晃容器洗涤细胞表面，去除残留的培养基和血清。
完全吸弃洗涤液。此步骤有助于提高 TrypLE™ Select 的效率，尤其是在血清残留较多时。
 
4.加入 CTS™ TrypLE™ Select 酶:
向容器中加入预热的 CTS™ TrypLE™ Select 酶液。用量是关键！
一般起始用量： 以能薄薄覆盖整个细胞层为准（例如 T-25 瓶约 1ml, T-75 瓶约 2-3ml）。请参考产品说明书或针对您特定细胞类型和容器优化的 SOP。
优化： 最佳用量和孵育时间高度依赖细胞类型、汇合度、培养容器和培养表面。需通过预实验确定最短有效时间，避免过度消化损伤细胞。通常比传统胰蛋白酶所需时间略长（几分钟到十几分钟）。
确保酶液均匀覆盖细胞层。可轻轻摇晃容器使其分布均匀。

5孵育:
将容器放回 37°C 培养箱 中孵育。
监控： 密切观察细胞形态变化。通常在 2-5 分钟后（具体时间需优化），在显微镜下检查。当大部分细胞变圆、边缘折光性增强、细胞间隙增大时（通常约 70-90% 细胞从底部脱离），即为解离完成的合适时机。避免孵育过久导致细胞损伤或死亡。

6.解离细胞:
从培养箱取出容器。
物理辅助： 用手掌用力拍打培养瓶侧壁几次，或使用无菌移液管轻柔吹打培养表面（沿细胞生长面移动吹打），帮助已松动的细胞完全脱落，形成单细胞悬液。
吹打技巧： 动作要轻柔但有效，避免产生过多气泡或剪切力损伤细胞。吹打次数根据细胞类型调整。

7.终止反应:
立即向含有细胞悬液的酶溶液中加入等体积或更多（通常 2-4 倍体积）的预热的含血清完全培养基（或预热的 CTS™ TrypLE™ Select 终止液）。血清中的蛋白酶抑制剂能迅速中和 TrypLE™ Select 的活性。这一步至关重要，必须及时进行！轻轻混匀。

8.收集细胞:
将容器内的细胞悬液（酶+中和液）转移至一个无菌的离心管中。

9.离心洗涤 (可选但常用):
根据后续实验需求（如传代、冻存、下游应用），通常需要洗涤去除残留的酶和中和液：
在离心管中，用不含 Ca²⁺/Mg²⁺ 的 DPBS 或适当的缓冲液将悬液体积补足。
在室温或 4°C 下进行离心（离心力需优化，常用范围 200-400 x g, 离心 3-5 分钟）。具体参数需根据细胞类型确定，避免过大离心力损伤细胞。小心吸弃上清液，避免扰动细胞沉淀。

10.重悬细胞:
根据后续用途（如接种、计数、冻存），用适量的预热的完全培养基或合适的缓冲液（如生理盐水、冻存液）轻柔地重悬细胞沉淀，吹打成单细胞悬液。
进行细胞计数，确定细胞浓度和活力。
 
产品规格
 

细胞类型	哺乳动物细胞
浓度	1 X
适用于（应用）	临床研究、转化研究
产品规格	瓶
环保功能	节能、可持续包装
生产质量	ISO 13485, MDSAP, FDA-registered, 21 CFR 820
数量	100ml
有效期	24 个月
运输条件	室温
分类	无动物来源
形式	液体
产品类型	细胞培养解离试剂
无菌	无菌过滤
不加添加剂	无酚红
Unit Size	Each

培养基配方
 

TrypLE™ Select CTS™A1285901
成分	分子量	浓度（mg/L）	毫米
无机Sa
氯化钾（KCI）	75.0	200.0	2.6666667
磷酸二氢钾	136.0	200.0	1.4705882
氯化钠（NaCI）	58.0	8000.0	137.93103
磷酸氢二钠	268.0	2160.0	8.059702
其他组件
乙二胺四乙酸	416.0	457.6	1.0
蛋白酶		机密的	n/a

内容与储存
在室温下储存。

引用和文献

Abstract
An effective freezing/thawing method for human pluripotent stem cells cultured in chemically-defined and feeder-free conditions.
 
Authors:Nishishita N, Muramatsu M, Kawamata S
Journal:
PubMed ID:25973330