植物DNA试剂盒及操作说明

Fast DNA Sample和FastPrep仪器的介绍

FastDNA试剂盒可从广阔的各种来源中快速有效地分离出genomic DNA，配套FastPrep仪器使用。动植物组织、细菌、海藻、真菌和其他许多标本，在40秒内容易被裂解。这个benchtop设备是一种专利性的垂直角度运动，这种运动使得裂解微粒能同时从多方向、同步地碰撞。FastPrep仪器提供一种极其快速、有效、高度可重复匀质化，超过了用酶消化、超声破碎仪、涡旋、混合传统提取方法。标本放在装有Lysing Matrix A的2.0 ml试管中。同时几乎全部的标本很容易用预先填充化合物进行加工，另外，1/4英尺的陶球用来加工坚硬的标本，比如：骨头、软骨和种子。在有CLS专样下,用Lysing Matrix A处理,在FastPrep仪器中将会匀浆化。对植物组织来说, CLS-VF用来和PPS连用。酵母、海藻和真菌在CLS-Y中被裂解。CLS-TC是用来裂解其他所以标本。为了获得最大的柔韧性，试剂会提供所有的缓冲液。裂解之后，标本被离心到pellet debris和lysing matrix。通过硅土基质GENECLEAN程序DNA被纯化。提取的DNA准备用来消化、电泳、PCR和其他任何期望的用途。

适用研究范围

动植物组织、细菌、酵母、藻类和真菌中分离基因组试剂盒

试剂盒组成

订购信息：

实验者需自备的仪器及耗材

FastPrep® Instrument                                （fastprep 仪器）

Microcentrifuge that can freely spin 2.0 ml tubes   （可装载2.0ml管子的离心管）

Microcentrifuge tubes (2.0 ml and 1.5 ml)           （可装载1.5和2.0ml管子的微型离心管）

Rotator or low-speed vortex

(Optional) SPIN Filters and Catch Tubes, 100

操作步骤

1.添加标本到Lysing Matrix A管中。

在水中或者是等渗盐溶液中，放置100 - 200 mg组织（新鲜、冰冻、干燥等）或者200 μl细胞悬浮液。对于细菌、酵母、海藻、或者是组织培养细胞是在悬浮液中生长，离心充足的培养体积，以便提供50-100 mg湿重的小球尺寸的标本。（在水或者等渗盐溶液中重新悬浮小球，获得200 μl的最大悬浮体积。）

2.根据下表添加适当的CLS。

3.在FastPrep仪器中用6.0设置的速度匀质化40秒钟。

4.以14,000转离心5-10分钟到pellet debris。

5.转移600 --700μl的悬浮液到一支2.0 ml微型离心管，加同等体积的Binding Matrix，颠倒混匀。

注释：在和下步之间，全部体积的完全混合，使用一支足够大的试管来提供空间是很重要的。不建议使用圆锥底的试管。在这步一支2.0 ml微型离心管就足够了。

6.在室温的条件下，搅拌器一般搅拌5分钟进行孵育。

注释：一台低速的旋涡机在这步可以用，但是操作必须小心，以免除去DNA。

7.在14,000转离心10秒钟到pellet Binding Matrix，去除上清液（悬浮液）。

8.添加500μl备好的SEWS-M，用吸量管轻轻地吹动液体的力量使小球重新悬浮。

注释：确保酒精加到浓缩的，参看3.1部分。

9. 14,000转离心1分钟，去除上清液。

注释：用旋转式移液器转移重新悬浮的Binding Matrix到另一只旋转式移液器。用14,000 转离心1分钟，去除枪头管里的物质。

10.用14,000转离心10秒钟，用小的吸量管移动剩余液体。

注释：如果用一支，用14,000转离心第二次，用新的干净的试管替代the Catch Tube。

11.在100μl的DES中，通过轻轻地重新悬浮的Binding Matrix洗提DNA。

12.用14,000 转离心1分钟，转移洗提的DNA到干净的微型离心管中。DNA可为下游应用作准备。为延长有效期将它存储在-20°C或者是4°C，直到使用。

注释：用一支吸量管小心转移DNA，以避免转移带有洗提DNA的Binding Matrix微粒，避免shearing。注释：用SPIN移液器，在14,000转离心1分钟，将洗提的DNA放入干净的catch tube。DNA可为下游应用作准备。为延长有效期将它存储在-20°C或者是4°C，直到使用。

附：

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