人脐带间充质干细胞成骨诱导分化培养试剂盒

一、 产品基本信息
名称：人脐带间充质干细胞成骨诱导分化培养试剂盒
产品编号：S-06-003

二、 产品简介
本产品由赛莱拉干细胞科技股份有限公司技术中心研发团队潜心研发优化的人脐带间充质干细胞成骨诱导分化培养试剂盒。包括间充质干细胞成骨分化基础培养基、人脐带间充质干细胞成骨诱导分化试剂盒和茜素红染色液。 本产品仅用于科研，不可用于临床治疗、诊断及其他用途。

三、主要组成成分包括
间充质干细胞成骨分化基础培养基 110mL 4℃保存
人脐带间充质干细胞成骨分化试剂盒 试剂A：1.25mL；试剂B：1.25mL；试剂C：12.5uL；试剂D：12.5mL。 -20℃冻存
茜素红染色液 10mL RT

四、使用说明：
1、配液前30 min左右，人脐带间充质干细胞成骨分化试剂盒中试剂A、试剂B、试剂C和试剂D预先放置室温溶解，可短暂离心（2000g），以确保试剂能全部收集。
2、于超净台内无菌环境打开间充质干细胞成骨分化基础培养基和四种试剂的瓶/管盖。
3、将试剂A、试剂B、试剂C和试剂D全部加入间充质干细胞成骨分化基础培养基中。可吸取少量基础培养基洗涤各试剂管，以确保四种试剂完全加入。
4、充分混匀后即可使用。
注：本试剂盒中的每个成分均为无菌分装，但为确保完全无菌，也可以将混合后的完全培养基进行再次过滤除菌（0.22 μm滤膜）。

五、产品稳定性及保存条件
1、间充质干细胞成骨分化基础培养基置于2-8℃保存，保质期为1年；
2、人脐带间充质干细胞成骨分化试剂盒置于-20℃保存，保质期为2年；
3、完全培养基配制好后于2-8℃保存，保质期为1个月。
4、茜素红染色液置于室温保存，保质期为2年。
5、保质期内使用。
6、避免反复冻融相关产品。

六、质量控制
人脐带间充质干细胞成骨分化培养基已使用人脐带间充质干细胞进行性能测试。
主要的鉴定标准包括：
1、无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）
2、内毒素检测3、渗透压检测
4、pH测试

七、产品使用示例
（以六孔板为例）实验操作流程：
1、人脐带间充质干细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中常规培养。
2、当细胞融合度达到80-90%时，用0.25%Trypsin-0.04%EDTA进行消化。
3、将消化下来的人脐带间充质干细胞按照1×104 cells/cm2 的细胞密度接种在六孔板中，每孔加入2 mL完全培养基。
4、将细胞置于37℃，5% CO2的培养箱中进行培养。
5、当细胞融合度达到60%-70%时，小心吸弃旧培养基，加入2 mL配制好的间充质干细胞成骨分化完全培养基。
6、每隔3天换用新鲜的人脐带间充质干细胞成骨分化完全培养基（诱导分化两周后可改为每隔2天换液一次）。
7. 诱导3周左右，观察细胞的形态变化及生长情况，用茜素红进行染色。
注：为了避免诱导过程中间质干细胞出现漂浮现象，建议对成骨诱导使用的培养器皿表面进行明胶包被。

八、操作步骤
1、细胞接种60min前，加适量0.1%明胶到培养器皿中，能覆盖整个培养器皿底面的量即可。
2、将铺有0.1%明胶的培养器皿放置培养箱内。
3、60min后弃去明胶，待培养器皿晾干后，即可用于接种细胞。

九、茜素红染色步骤
1、吸弃六孔板中的培养基,1×PBS冲洗2-3次。每孔加入2 mL 4%多聚甲醛溶液，固定15-20 min。
2、吸弃4%多聚甲醛溶液,1×PBS冲洗3-4次。每孔中加入1 mL茜素红染液染10-15 min。
3、吸弃茜素红染液,1×PBS冲洗2-3次。
4、于显微镜下观察成骨染色效果。

十、染色效果实例图片

成骨分化组 阴性对照组
（人脐带间充质干细胞）

温馨提示：不可用于临床治疗。