湖北致康生物科技 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残毒快速检测 酶抑制率法（分光光度法）专用试剂 使用说明 本试剂为国家标准快速检验方法GB/T5009.199-2003的专用配套试剂。酶活性和对农药的灵敏度指标均达到或超过了国家标准要求，可以在各种型号的农药残毒检测仪（分光光度法）上使用，具有稳定性好、灵敏度高和使用方便等特点。 一、试剂配制 1. 缓冲液试剂：整包倒入大烧杯中，加1000mL纯净水溶解，酸碱度为pH8.0，常温保存； 2. 乙酰胆碱酯酶：取一支酶粉加20mL缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存，一周内用完。也可将溶解后的酶液分成几个小瓶，将其冷冻，用时融化，但不能重复多次冷冻、化解。 3. 显色剂：取一支显色剂加入20mL缓冲溶液，避光保存； 4. 底物：取一支底物加20mL缓冲溶液，摇匀后置4℃冰箱中保存； 二、分析步骤 1. 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，（非叶菜类取2g）放入烧杯或提取瓶中，加入5mL缓冲溶液，手摇振荡1～2分钟，或超声波振荡30秒钟，倒出提取液，静置3~5min，待用。 2. 对照溶液测试： 先于试管中加入100微升酶液和100微升显色剂，再加入2.5mL缓冲溶液，摇匀后于37°C放置15min，加入100微升底物摇匀，此时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录初始吸光度A1和反应3 min时的吸光度A2，A2-A1=DA0。 3. 样品溶液测试：先于试管中加入100微升酶液和100微升显色剂，再加入2.5mL样品提取液，其它操作与对照溶液测试相同，记录初始吸光度A1和反应3 min时的吸光度A2，A2-A1=DAt。 三、结果计算 结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。 抑制率(%)=[ (DA0-DAt)/ DA0]×100 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时，表示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农药存在，样品为阳性结果。阳性结果的样品需要重复检验2次以上。 对阳性结果的样品，可用其它方法进一步确定具体农药品种和含量。 四、注意 1. 每批样品的控制时间、温度条件必须与对照溶液的条件完全一致。 2. 葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处理这类样品时，不要剪的太碎。对一些含叶绿素较高的蔬菜，也不要剪的太碎。 3. 当温度条件低于37°C，酶反应的速度随之放慢，加入酶液和显色剂后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定，应以胆碱酯酶对照溶液测试得到的吸光度A2-A1≥ 0.3以上，即可往下操作。当对照溶液酶液的加入量大一些时，也可使A2-A1≥0.3以上。 4. 当吸光度大到无法读取时，说明测定液浑浊有干扰。 五、产品有关技术指标 1. 代表性农药的检出下限见下表 农药名称 检出限mg/kg 标准要求检出限mg/kg 甲胺磷 0.65 2.0 氧化乐果 0.5 0.8 敌敌畏 0.01 0.1 呋南丹 0.01 0.3 2. 乙酰胆碱酯酶的活性：（室温20°C以上进行实验）DA0≥0.3。 六、包装及保存条件 每包可做200份样品，0°C以下冰箱冷冻保质期为一年，配成试剂后保存期为一周。