植物基因组DNA快速提取试剂盒

产品组分

● 漂洗液PE 初次使用前用无水乙醇按1: 3 稀释，即含75%乙醇。

● 客户自备试剂

   无水乙醇

   巯基乙醇 

   氯仿(或酚：氯仿/1 ：1)

产品说明

本产品可用于拟南芥、烟草、水稻等植物样本的基因纯化。纯化原理是利用硅胶膜柱可逆吸附体系中的DNA，经漂洗液清洗除去蛋白质、脂质以及多纯化液洗脱获得基因组DNA。一次可从不超过100材料中提取到 2-20μg的高纯度基因组OD260/OD280=1.7-1.9），此基因组DNA 可直接酶切等后续实验。

质量控制

纯化的基因组 DNA 质量通过限制性酶切和单拷

保存条件

RNase 保存于-20℃。其他的室温保存

注意事项----------------------------------------------------------------------

● 漂洗液PE 第一次使用前请按瓶上标签加入3 倍体积的无水乙醇，即15ml 漂洗液PE 加入45ml 无水乙醇，30ml 漂洗液PE加入90 ml 无水乙醇，使用后立即盖紧盖子。

● 缓冲液GPL 室温保存可能会有沉淀产生，在56℃加热溶解，待恢复室温后混匀即可使用。不会影响基因组DNA 纯化效率。

● 应尽量使用新鲜的实验材料，确保提取的基因组DNA 不被降解。不能立刻提取基因组DNA  的实验材料应尽快置于液氮或-70℃冰箱中保存并避免反复冻融。

● 使用液氮研磨组织材料时，应随时加入液氮，确保提取的基因组DNA 不被降解。

● 基因组DNA 需长期保存时，建议使用纯化液TE 。用无菌的离心管分装后保存于-20 ℃或-80 ℃。

● 所有离心步骤均为室温下进行。

● 请严格按照操作步骤操作。

操作步骤----------------------------------------------------------------------

1  取植物新鲜组织约100 mg 或干重组织约30 mg，加入液氮充分研磨。

2  将研磨好的粉末迅速转移到预先装有700 μl 65℃预热缓冲液GPL 的离心管中（实验前在预热的GPL 中加入巯基乙醇，使其终 浓度为0.1% ），加入1 μl RNase，迅速颠倒混匀后，将离心管放在65℃水浴20 min，水浴过程中颠倒离心管以混匀样品。

3  加入700 μl 氯仿，充分混匀，12,000 rpm  （~13,400 ×g ）离心5 min 。

   ● 如果是提取富含多酚或淀粉的植物组织，可在第3 步前，用酚：氯仿/1 ：1 进行等体积抽提。

4  小心将上一步所得上层水相转入一个新的离心管中，加入等体积缓冲液GPD，充分混匀。

5  将混匀的液体转入纯化柱，静置1 min，12,000 rpm 离心30 sec,弃滤液。（吸附柱容积为700 μl 左右，可分次加入离心。）

6  向纯化柱中加入500 μl 去蛋白液PS。12,000 rpm 离心30 sec,弃滤液。

7  向纯化柱中加入500 μl 漂洗液PE。12,000 rpm 离心30 sec,弃滤液。

8  重复步骤7，向纯化柱中加入500 μl 漂洗液PE。12,000 rpm 离心30 sec,弃滤液。

9  离心纯化柱，12,000 rpm 离心2 min，以彻底去除纯化柱中残留的液体。

   ● 此步骤的作用是去除残留乙醇，避免影响后续的酶促反应（PCR 或酶切）。同时利于基因组DNA 充分溶解。

10  将纯化柱置于新的1.5 ml 离心管中。向纯化柱中央处，悬空滴加40-100μl 纯化液TE 。室温放置2 min 。12,000 rpm 离心2 min， 管底即为高纯度基因组DNA。-20℃保存。

  ● 纯化液TE 可用去离子水代替，但其pH 需为8.0-8.5 。

 ● 对纯化液TE 60℃预热，会提高基因组DNA 的产量。