原代细胞/细胞系

 上海柏根生物科技有限公司    原代细胞特性介绍

一、 原代细胞共性

原代细胞现在广泛应用于分子、细胞生物学和生物医学基础研究，如蛋白质组学、基因组学、细胞株（系）研究、DNA，RNA和遗传学研究等，还应用于当今热门的生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究等。原代细胞在生物医药领域有不可替代的作用，市场前景十分广阔。我国原代细胞用于实验才刚刚开始，随着实验要求的提高和全球生物医药研发重心的东移，我国对原代细胞的需求在逐年递增。

除了部分终末分化的细胞，一般的细胞都能传代6-8代及以上，有些细胞甚至更多，但是一般都建议客户采用3-4代以内的细胞。

在原代细胞培养过程中，一般是初次培养过夜后换液，以后每隔2-3天换一次液，以培养液的颜色为标准，一般变黄后就需换液。原代细胞的传代前期一般是3-4天传一次代，后期一般是4-6天传一次代（前期指前三代，后期指三代后）。

二、 不同类原代细胞特性

1. 终末分化的细胞：心肌细胞、II型肺泡细胞(上皮细胞)、小脑颗粒细胞（神经元）、脂肪细胞、角质形成细胞。 终末分化细胞无增殖能力，建议使用新鲜的原代细胞。

2. 上皮类细胞：血管内皮、肾小球内皮细胞、气道上皮、结肠直肠上皮、小肠上皮、子宫颈上皮、胰腺导管上皮、肾上皮、肾小管上皮、前列腺上皮、乳腺上皮、甲状腺上皮、角膜上皮细胞等。

上皮类细胞大多都能增殖传代6-8代，但多数上皮类细胞的生长伴随着成纤维细胞的大量增殖，3-4代后成纤维细胞成为优势细胞，建议使用原代或者3-4代以内的传代细胞。人体组织来源的上皮类原代细胞增殖能力较弱，建议选用原代细胞进行实验研究。

3. 嗅球成鞘细胞：属于神经胶质细胞，可增殖传代，体外培养3-4代后成纤维细胞成为优势生长细胞，建议使用原代或者3-4代以内的传代细胞。

4. 骨骼肌、平滑肌细胞：可增殖传代，至少10-12代。

5. 成骨细胞、关节软骨细胞：可增殖传代，至少6-8代，但其生长伴随有成纤维细胞的污染，3-4代后成纤维细胞成为优势生长细胞，建议使用原代或者3-4代以内的传代细胞。

6. 角质细胞、黑素细胞：均取自动物表皮，角质细胞易分化，原代培养6-7天后逐渐分化并死亡。表皮组织中黑素细胞含量较少，原代培养的黑素细胞可增殖传代，至少6-8代，3-4代后成纤维细胞成为优势生长细胞，建议使用原代或者3-4代以内的传代细胞。

7. 胰岛细胞：可增殖传代，至少8代，但其生长伴随有成纤维细胞的污染，3-4代后成纤维细胞成为优势生长细胞，建议使用原代或者3-4代以内的传代细胞。

8. 肝细胞：原代培养的肝细胞不易增殖，建议使用新鲜的原代细胞。

三、产品规格和质量鉴定

1、产品规格和细胞数量

T-25 flask: 1×106/瓶

T-75 flask: 3×106/瓶

6孔板： 5×105/孔，细胞总数3×106；

12孔板： 2×105/孔，细胞总数2.4×106；

24孔板： 1×105/孔，细胞总数2.4×106；

48孔板： 5×104/孔，细胞总数约2.4×106；

96孔板： 2.5×104/孔，细胞总数约2.4×106；

2、细胞鉴定

柏根生物提供的原代细胞纯度均大于90%，原代细胞鉴定可通过形态学和免疫化学方法，如需提供免疫化学染色方法和图片，需要额外收取服务费用500元。

3、订货周期

大鼠、小鼠各类原代细胞的定制周期一般为2周。

人源细胞定制周期一般4周，特殊组织如心脏需要1-3个月不等。

四、细胞运输

新鲜原代细胞培养器皿有方瓶和孔板两种规格。细胞培养方瓶可采用快递运输（免运费）；孔板可人工提货或者专人送货上门，或选择国内的特殊快件运输，由客户承担运费。新鲜的原代细胞常温运输即可，不需要冰袋或者干冰等。

冻存的细胞采用快递冷冻运输。结合细胞的特性和客户的需要，可选择冻存方式发货或者复苏后发货。

五．收到细胞后的处理

1． 客户收到细胞后(T25或者T75 flask)，若无运输问题，请用75％酒精消毒后，拆下封口膜，放入细胞培养箱中静置6-8h或者过夜；待细胞状态稳定后，倒出多余的培养基（可用于后续的培养），细胞培养瓶中保留适量继续培养。24h后，细胞贴壁良好，换液，2-3天后细胞可达到80-90％融合。

2． 客户收到细胞后(细胞培养孔板)，若没有运输问题，请用75％酒精消毒后，拆下封口膜，放入细胞培养箱中静置6-8h；待细胞状态稳定后，补液到适量。24h后，细胞贴壁良好，换液，2-3天后细胞可达到80-90％融合。

3． 收到冻存的原代细胞后，立即将冻存细胞从干冰移入液氮中冻存过夜后复苏，此过程尽量快速避免升温。不要将细胞储存在-80℃，这样会对细胞造成不可挽回的伤害。细胞快速复苏后无需即刻离心除去DMSO，因为离心过程比残留DMSO对细胞的伤害更大；6-8h后换新鲜培养基，或者可隔天换液（可适当增加培养基量，使DMSO浓度小于1%），2-3天后原代细胞可达到80-90％融合。

4．收到存活的原代细胞时，由于运输途中颠簸等原因，原代细胞可能会出现收缩或者脱壁现象，需静置培养24小时后再行观察。

六、 肝亚组分

1. 介绍：肝亚组分包括肝微粒体、肝S9、CYP450酶等成分。

肝微粒体是来源于肝脏内质网膜的亚细胞组分，富含大量的药物代谢酶，被广泛的用来评价药物或候选化合物的体外代谢特征：1) 代谢稳定性(体外T1/2 和固有清除率CLint)；2) CYP450代谢表型研究(确认主要的代谢酶)；3) 药物对CYP450各亚型酶的抑制作用(IC50)；4) 代谢物和代谢途径的鉴定。

2. 柏根生物科技可以提供：

1） 各种种属的肝微粒体(包括人、大鼠和小鼠)

2） 单个个体产品和混合产品

3） 雌性和雄性产品

4） 诱导和非诱导产品(大鼠和小鼠)

3. 规格：冻存管包装，20mg/ml，0.5ml/管。

4. 运输：-70℃保存，干冰运输。

5. 保证：每批产品都经过活性考察，并提供各项活性检测指标。

6. 订货周期：现货供应，如没有现货，定制周期为2周。