1. Cell Counting Kit-8简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。
2. WST-8是一种类似于MTT的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的formazan (参考图1)。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

 
      3. WST-8是MTT的一种升级替代产品，和MTT或其它MTT类似产品如XTT、MTS等相比有明显的优点。首先，MTT被线粒体内的一些脱氢酶还原生成的formazan不是水溶性的，需要有特定的溶解液来溶解；而WST-8和XTT、MTS产生的formazan都是水溶性的，可以省去后续的溶解步骤。其次，WST-8产生的formazan比XTT和MTS产生的formazan更易溶解。再次，WST-8比XTT和MTS更加稳定，使实验结果更加稳定。另外，WST-8和MTT、XTT等相比线性范围更宽，灵敏度更高。
      4. WST-8和WST-1相比，检测灵敏度更高，更易溶解，并且更加稳定。
      5.本试剂盒可以用于细胞因子等诱导的细胞增殖检测，也可以用于抗癌药物等对细胞有毒试剂诱导的细胞毒性检测，或一些药物诱导的细胞生长抑制检测。
      6.本试剂盒检测非常便捷。试剂盒仅一管已经配制好的含有WST-8的CCK-8溶液，无须再进行任何配制等操作。无须使用同位素，所有的检测步骤仅在同一块96孔板内完成。不必洗涤细胞，不必收集细胞，也不必采用额外的步骤去溶解formazan。可以用于大批量样品的检测。
       7.酚红和血清对本试剂盒的测定无明显影响。
       8.WST-8对细胞无明显毒性。加入WST-8显色后，可以在不同时间反复用酶标仪读板，使检测时间更加灵活，便于找到最佳测定时间。
       9.本试剂盒可以测定100个样品。
       10.包装清单：

产品编号	产品名称	包装
CCK02	CCK-8试剂	1ml

      11.-20℃避光保存两年有效。
使用说明：
1. 通常细胞增殖实验每孔加100μl 2000个细胞，细胞毒性实验每孔加100μl 5000个细胞(具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等因素决定)。按照实验需要，进行培养并给予0-10μl特定的药物刺激。
2. 每孔加10μl CCK-8溶液。如果起始的培养体积200μl，则需加20μl CCK-8溶液，其它情况以此类推。可以用加了相应量细胞培养液和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。如果担心所使用的药物会干扰检测，需设置加了相应量细胞培养液、药物和CCK-8溶液但没有加入细胞的孔作为空白对照。
3. 在细胞培养箱内继续孵育0.5-4小时，对于大多数情况孵育1小时就可以了。时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等实验情况而定，初次实验时可以在0.5、1、2和4小时后分别用酶标仪检测，然后选取吸光度范围比较适宜的一个时间点用于后续实验。
4. 在450nm测定吸光度。如无450nm滤光片，可以使用420-480nm的滤光片。可以使用大于600nm的波长，例如650nm，作为参考波长进行双波长测定。
5. 如果需要暂时不测定O.D值，可以向每孔中加入10ul 0.1M HCl溶液或者1% w/v的SDS溶液，避光保存在室温，24小时内吸光度不会发生变化。
注意事项：
 

1. 使用96孔板进行检测时，如果细胞培养时间较长，请注意蒸发问题。可将96孔板外围一圈加培养基、水或PBS保湿。同时，可以把96孔板置于培养箱内靠近水盘的位置以缓解蒸发。
2. 培养时间根据细胞种类的不同和每孔内细胞数量的多少而不同。在正式实验前，建议先做预实验摸索铺板的细胞数量以及加入7Sea-CCK-8试剂后的培养时间。
3. 铺板时请注意保证每个孔细胞数量均匀，建议铺板过程中注意时常混匀，防止因细胞沉淀造成不均匀。加入7Sea-CCK-8后请前后左右轻轻晃动培养板数次，使培养基和7Sea-CCK-8溶液充分混匀。
4. 本试剂盒的检测依赖于脱氢酶催化的反应，如果待测物质有氧化性或还原性，可在加7Sea-CCK-8之前更换新鲜培养基，去掉药物的影响。若药物影响比较小的情况可以不更换培养基，直接扣除培养基中加入药物后的空白吸收即可。
5. 加入7Sea-CCK-8时，如果细胞培养时间较长，培养基颜色或pH值已变化，建议换用新鲜的培养基。
6. 用酶标仪检测前需确保每个孔内没有气泡，否则会干扰测定。
7. 本试剂盒系无菌灌装生产。在使用过程中，请在生物安全柜内无菌操作，避免污染。
8. 为了您的健康和安全，请穿着实验服并戴一次性手套或乳胶手套操作。

 
 

温馨提示：不可用于临床治疗。