Name：Histostain-Plus IHC Kit, DAB，Mouse | Histostain-Plus IHC Kit, DAB, Rabbit

Catalog No：PH0722 | PH0723

Size： 60T (3mL) |  120T (6mL) |  300T (15mL)  

Storage：Store@2～8℃

试剂简介

适用于免疫组化方法的石蜡包埋、冰冻切片、培养细胞涂片及血液标本

试剂组分

1. 试剂A: 封闭液，为10％山羊血清。1瓶，即用型；3mL(60 张片)或6mL(120 张片)或15mL(300 张片)；

2. 试剂B: 抗小鼠IgG生物素化二抗/抗兔生物素化二抗。1瓶，即用型；3mL(60 张片)或6mL(120 张片)或15mL(300 张片)；

3. 试剂C: 链亲和素标记HRP。1瓶，即用型；3mL(60 张片)或6mL(120 张片)或15mL(300 张片)；

4. 试剂D:20倍浓缩DAB底物缓冲液。一支，160μL(60 张片)或320μL(120 张片)或800μL(300 张片)；

5. 试剂E:20倍浓缩DAB显色液。一支，160μL(60 张片)或320μL(120 张片)或800μL(300 张片)；

6. 试剂F:20倍过氧化氢溶液。一支，160μL(60 张片)或320μL(120 张片)或800μL(300 张片)；

7. 7mL黑色滴瓶 (空)，用于稀释浓缩DAB用。如果要重复使用，一定要及时洗干净！避免污染下次试剂。

自备材料

二甲苯、乙醇、无水甲醇

2. 蒸馏水或去离子水

3.30％ H2O2

4.10mMPBS,pH7.4或50mMTBS, pH7.8

5. 一抗（小鼠/兔抗体）

6. 苏木精染液

7. 封片胶

8. 显微

使用参考

推荐染色步骤： （以石蜡切片为例）

1. 标本制备

石蜡切片用二甲苯常规脱蜡、入水、抗原修复（可根据一抗说明书推荐方法进行操作）。染色前用PBS浸泡组织或细胞涂片10分钟。 （注意：从此步骤起，严禁标本或组织切片干燥）

2. 染色

(1) 石蜡切片放入3％H2O2-甲醇液中浸泡10分钟，以消除内源性过氧化氢酶的作用；

(2) 用PBS洗2 分钟/次×3次；

(3) 加一滴试剂A于组织切片上（需完全覆盖待检组织）孵育10分钟；

(4) 倒掉或吸干液体（不要冲洗）；

(5) 每张切片加二滴 （100μL） 或适量一抗 （需完全覆盖待检组织）， 湿盒内孵育30～60min;

(6) 用PBS洗2分钟/次×3次；

(7) 每张切片加一滴试剂B（需完全覆盖待检组织），孵育10分钟；

(8) 用PBS洗2分钟/次×3次；

(9) 每张切片加一滴试剂C（需完全覆盖待检组织），孵育10分钟；

(10) 用PBS洗2分钟/次×3次；

(11) 制备DAB显色液（需现用现配；以染一张切片为例；可根据需要一次染多张切片，具体用量见下表1）；

① 取2.5μL试剂D加入到50μL蒸馏水中，混匀；

② 取2.5μL试剂E、2.5μL试剂F加入①中，混匀；

(12) 每张切片加一滴上述DAB显色液，室温显色2～5分钟（可在镜下掌握显色程度）；

(13) 自来水充分冲洗；

(14) 复染，盐酸酒精分化；

(15) 脱水、透明、封片、镜检。

3.结果

阳性结果为在抗原定位处染棕黄或棕褐色。

配制 DAB 显色液所需试剂 D、E、F 用量表1

切片数（张） 试剂 D 试剂 E 试剂 F 蒸馏水

1 2.5μL 2.5μL 2.5μL 50μL

2 5μL 5μL 5μL 100μL

3 7.5μL 7.5μL 7.5μL 150μL

4 10μL 10μL 10μL 200μL

5 12.5μL 12.5μL 12.5μL 250μL

6 15μL 15μL 15μL 300μL

7 17.5μL 17.5μL 17.5μL 350μL

8 20μL 20μL 20μL 400μL

9 22.5μL 22.5μL 22.5μL 450μL

10 25μL 25μL 25μL 500μL

20 50μL 50μL 50μL 1mL

30 75μL 75μL 75μL 1.5mL

40 100μL 100μL 100μL 2mL

50 125μL 125μL 125μL 2.5mL

60 150μL 150μL 150μL 3mL

100 250μL 250μL 250μL 5mL

注意事项

1. 检测标本时需同时做阴性对照和阳性对照；

2. DAB是一潜在致癌物，使用时请注意自我防护；

3. DAB显色液需现用现配，避光放置，且在30分钟内染色；

4. 用滴瓶加液时，每一滴的体积为50μL。

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