SM-Zol Reagent^®

总RNA提取试剂

货号：Cat.No.- M5100   Size： 100ml                                             

• 产品介绍

    SM-Zol Reagent 适用于快速、直接从多种组织和细胞中提取总RNA的一种广谱型试剂。SM-Zol Reagent内含优化的异硫氰酸胍、酸性酚等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶，最大限度地裂解样品且同时保证RNA的完整性。加入氯仿离心后，溶液会分成三层：上层无色水相、中间层和下层红色有机相，其中RNA分布在上清无色水相中。本试剂操作快速方便，颜色分明，提取的总RNA完整性好，纯度高，无蛋白和DNA的污染，可用于各种分子生物学实验，如RT-PCR、Real-time PCR、Dot Blot、Northern等。

• 产品特色

• 使用范围广：对人、动物、植物和细菌组织提取均适用
• 操作快速：一个小时内可完成纯化步骤
• 颜色分明：溶液呈粉红色，便于分离水相和有机相
• 提取纯度高：DNA和蛋白质污染最低，可用于多种下游实验
• 产量高：最大程度地获得样品中的RNA

• 操作步骤

准备试剂（自备）：异丙醇、氯仿、75%乙醇（用DEPC处理的双蒸水配制）、无RNase的水。

1. 各种材料样本的匀浆处理

（a）贴壁培养的细胞：吸去培养基，用PBS清洗一次，在培养板中直接加入适量的SM-Zol Reagent（每10cm²生长的培养细胞中加入1ml的SM-zol Reagent），水平放置片刻，便于裂解液均匀分布细胞表面裂解，再使用移液器吹打细胞并移至收集管中。

注意：（1）收集细胞数量不要超过1X10⁷/ml SM-Zol Reagent；

（2）SM-Zol Reagent加入量根据培养板面积确定，若是SM-Zol Reagent加入量不足，可能导致提取的RNA中有DNA污染。

（b）悬浮培养细胞：将悬浮培养的细胞和培养基一起倒入离心管中，离心收集细胞，每5X10⁶-1X10⁷动植物、酵母或细菌细胞加入1ml SM-Zol Reagent。

注意：（1）部分酵母和细菌细胞可能需要匀浆仪或液氮研磨处理；

（2）加入SM-Zol Reagent前不要洗涤细胞，以免RNA降解。

（c）动物、植物组织：取新鲜或-70℃冷冻的动植物组织在液氮中充分减碎研磨，将研磨成粉状的样品转移至离心管中，每20-50mg组织加入1ml SM-Zol Reagent，匀浆仪进行匀浆处理。

注意：（1）要在液氮等低温下处理样品组织，避免RNA降解；

（2）样品体积一般不要超过SM-Zol Reagent体积的10%。

2. 样品在加入SM-Zol Reagent 后用移液器反复吹打几次，直至裂解液中无明显沉淀，使样品充分裂解。室温静置5分钟，使得蛋白质核酸复合物完全分离。

3. 向上述溶液中加入氯仿，每使用1ml SM-Zol Reagent加入0.2ml氯仿，剧烈振荡15秒，室温静置5分钟。

4. 12,000g, 4℃离心15分钟，此时样品会分为三层：红色有机相、中间层和上层无色水相。其中RNA主要在水相中，将水相（约500ul）转移至一个新的RNase-Free的离心管中。

5. 在得到的无色水相的离心管中，每使用1ml SM-Zol Reagent 加入0.5ml异丙醇（等体积的异丙醇），颠倒混匀，室温静置10分钟。

6. 12,000g, 4℃离心10分钟，弃去上清，在管壁和管底形成胶状沉淀，即RNA。

7. 加1ml 75%乙醇（用DEPC处理的双蒸水配制）洗涤沉淀，每使用1ml SM-Zol Reagent 用1ml 75%乙醇，然后8,000g, 4℃离心5分钟。

8. 弃去上清（为了获得更纯的RNA，应尽量除尽乙醇），室温晾干沉淀（大约5分钟左右）。

9. 加入20-50ul的无RNase的水，充分溶解RNA，样品保存于-70℃以备长期使用。

操作示意图

• 保存条件

4℃保存，室温运输，2年有效；

• 注意事项

1. 预防RNase污染，降解RNA，如：使用无RNase的塑料制品和枪头，操作时要戴一次性口罩和手套，实验过程中要勤换手套。

2. 加入氯仿后，一定要充分振荡，保证RNA提取的效果

3. 使用的样本避免反复冻融，以免影响RNA的产率和质量。

4. SM-Zol Reagent含有苯酚，具有毒性和腐蚀性，使用本制品时要穿戴防护物品，避免吸入体内、接触皮肤、吞食等现象发生。如果不小心发生，应立即用大量的水冲洗并前往医院治疗。