细胞增殖和毒性检测试剂

CellViab Blue

细胞增殖和毒性检测试剂

货号：Cat. No.：C20001   Size: 1 ml（试用装）

货号：    Cat. No.：C20010     Size: 10 ml

货号：    Cat. No.: C20025     Size: 25ml

CellViab Blue是一种简便、快速、可靠和安全的检测细胞增 殖和细胞毒性的

方法，可在30分钟至2小时内有效测定动物、真菌和细菌细胞的天然代谢

活性，适用于高通量检测实验。该试剂是一种氧化还原指示剂，其在氧化状

态下呈现紫蓝色，无荧光性。在细胞增殖过程中，细胞内NADPH/NADP、

FADH/FAD、FMNH/FMN和NADH/NAD的比值升高，处于还

原环境状态下，使得该试剂呈粉色或红色荧光的还原物，具

有荧光性，反映细胞或微生物对氧分子的消耗，以显示细胞的

代谢活动。可以用荧光光度计检测，其激发光波长在530-560 nm之间，

发射光波长为590 nm，能广泛地用于细胞增殖代谢，药物的细胞毒作用的

体外测定以及病原微生物的的快速检测与鉴定。

• 单组份试剂，可以连续、快速地检测细胞的增殖状况，在30分钟至2小时内完成实验
• 对细胞无毒、无害，不影响细胞代谢、细胞因子分泌、抗体合成等，可以对同一批细胞的增生状态进行连续观察和进一步的实验观察
• 适用于细菌、酵母类、昆虫类、鱼类、哺乳类等多种细胞，以及贴壁细胞与非贴壁细胞的检测
• 灵活、简便- 能与多种仪器平台、96 和 384 孔板以及荧光测定兼容

1. CellViab Blue 检测试剂是10倍浓度的浓缩液，直接将CellViab Blue试剂加入到细胞培养基中。加入体积量可参考下表：

注意：为了校准背景值，需设置对照孔，即只含有培养基不含有细胞的对照孔

2. 在37℃条件下孵育细胞30分钟至2小时之间，培养基的颜色由蓝色变成粉色就可以进入到下一步实验。

注意：延长孵育时间，可增加检测灵敏度。不同细胞对该试剂敏感度不同，若是2小时变化不明显，可将孵育时间延长至4-6小时，再进入下一步实验。

3. 推荐使用荧光分光光度计进行检测，其激发光波长在530-560 nm 之间，发射光波长为590 nm，记录荧光单位(FU)。

4. 收集数据并分析，更高的荧光值表明更高的细胞活力。绘制细胞生长曲线：纵座标(Y轴)为荧光单位(FU);横坐标(X轴)为细胞数或时间点或药物浓度。

也可以计算细胞活力，计算方式如下：

荧光分光光度计检测：CellViab Blue 还原率（%）=（实验组F590-阴性对照组F590）/(100%还原型阳性对照F590-阴性对照组F590)X100  注：F590=590nm波长荧光值。

5. 为了测定最佳孵育时间和细胞数量，需制作标准曲线，即等比稀释成一个细胞浓度梯度，实验步骤同上，根据测定数据绘制标准曲线。

操作示意图：

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• 4℃避光保存，有效期24个月
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1. 细胞增殖测定：CellViab Blue是水溶性的，在培养基中稳定且无毒。

2. 细胞活性分析，包括细胞毒性：代谢活性以及染料的形成与细胞的活性和损伤成比例。

3. 细胞因子分析：测定细胞因子诱导的增殖，必要时，可在试验结束时回收和扩增细胞

1.细胞密度影响CellViab Blue反应情况，合适密度的细胞可以增加检测灵敏度。对于96 孔板，我们建议每孔接种100 微升细胞，细胞浓度范围为：贴壁细胞在100-10,000/孔，悬浮细胞在2,000-50,000/孔，并以培养基为空白对照。对于384 孔板，细胞浓度和接种量均减半。

2. 整个过程均应为无菌操作，因为微生物污染物同样可以还原检测试剂而影响实验结果。

3.细胞作用的时间影响CellViab Blue反应情况，正常情况下30分钟至2小时内就可以检测，但不同细胞类型及数量对CellViab Blue灵敏度不一致，注意接种细胞浓度和加入检测试剂后孵育时间。细胞浓度过高或孵育时间过长，会导致继发性还原反应，产生无色和荧光消失。细胞浓度过低或孵育时间过短，会导致灵敏度降低，可以延长反应时间。

4. 孵育时，须避光。

5. 本产品可以使用荧光或分光光度检测，但荧光的灵敏度高，实验误差小，推荐使用荧光检测。