hCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞    hCMEC/D3(永生化人脑微血管内皮细胞)    
    【细胞货号】    C0447
    【细胞缩写】    hCMEC/D3细胞
    【细胞名称】    hCMEC/D3(永生化人脑微血管内皮细胞)
    【背景资料】    见细胞说明书
    【细胞来源】    细胞主要来源ATCC、hCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系
    【代次】    P4
    【规格】    复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）
    【细胞数】    1*10（6）
    【生物安全级别】    1
    【生物体】    人
    【组织来源】    大脑；组织：血脑屏障
    【细胞形态】    内皮
    【细胞特性】    贴壁
    【细胞活力】    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
    【细胞检测】    细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
    【培养条件】    详见细胞说明书
    【传代方法】    建议1:2-1:3 两天换液一次
    【冻存条件】    详见细胞说明书
    【主要文献】    请具体查阅相关发表文章
接收后的操作流程与注意事项：
1、如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞即时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶继续培养3天；hCMEC/D3永生化人脑微血管内皮细胞同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基培养3天。3天后若原瓶或者新瓶中的细胞都没有出现增值而是继续脱落死亡，请及时联系实验室技术人员会跟进解决
2、贴壁细胞生长缓慢；适当提高血清浓度（最高不能超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养
3、生长不均：贴壁细胞若出现分布不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重悬打散细胞，加入新鲜培养基进行培养
细胞常规培养传代流程（请严格遵照无菌操作）
1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞（注意把握消化时间，通常控制在1-2min）
2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6-8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散
3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养
4、注意培养基PH值变化情况，定期换液（每周2-3次），待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存
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