Saos-2人成骨肉瘤STR检测细胞

Saos-2人成骨肉瘤STR检测细胞    
【细胞货号】    C4710
"选择正确的培养基：不同的细胞可能培养基不同，甚至不同的文献可能对相同的细胞培养基成分也是可能不同的。如我当时培养神经干细胞，有文献就选用neurobase培养基，而我的实验目的主要是做抗氧化和氧化方面的，而这种培养基中含有抗氧化剂成分，此时，我就不得不选择另外一种不含抗氧化剂的培养基。
瓶装血清一定要逐步解冻: 4℃冰箱全溶后再分装，在溶解过程中须规则摇晃均匀小心勿造成气泡，使温度与成分均一，减少沉淀的发生。勿直接由–20℃直接至37℃ 解冻，因温度改变太大，容易造成蛋白质凝结而发生沉淀。
热灭活是指56℃，30分钟加热已完全解冻之血清。水浴锅升到56℃后，将血清放入，待温度升高到56℃后计时，一般5分钟左右规则摇晃均匀一次。此热处理之目的是使血清中之补体成份去活化。除非必须，一般不要作此热处理，因为会造成沉淀物之显著增多，且会影响血清之品质。注意更换新血清包括不同批次对细胞的影响。【细胞缩写】"    Saos-2细胞
【细胞名称】    Saos-2(人成骨肉瘤细胞)
【背景资料】    该细胞是Fogh J和Trempe G分离和鉴定的众多人类肿瘤细胞系中的一种；该细胞来自一位11岁的白人女性的骨肉瘤组织。患者经过放疗以及氨甲喋呤、阿霉素、长春新碱、环磷酰胺和 aramycin-C等多种药物治疗。该细胞在免疫抑制小鼠中不致瘤，细胞表达表皮生长因子EGF受体、转化生长因子β（1型和2型）受体。
【细胞来源】    细胞主要来源ATCC、DSMZ、ECACC、RIKEN、promocell、ScienCell、ECACC、JCRB、KCLB、Asterand、ICLC以及少数国内外著名大学建系
【代次】    P4
【规格】    复苏T25培养瓶(一瓶)或冻存1ml冻存管（两支）
"细胞冻存及复苏基本知识普及：
细胞冻存是细胞保存的主要方法之一。利用冻存技术将细胞置于-196℃液氮中低温保存，可以使细胞暂时脱离生长状态而将其细胞特性保存起来，这样在需要的时候再复苏细胞用于实验。而且适度地保存一定量的细胞，可以防止因正在培养的细胞被污染或其他意外事件而使细胞丢种，起到了细胞保种的作用。
除此之外，Saos-2人成骨肉瘤STR检测细胞还可以利用细胞冻存的形式来购买、寄赠、交换和运送某些细胞。细胞冻存时向培养基中加入保护剂--终浓度5%.15%的甘油或二甲基亚砜DMSO，可使溶液冰点降低，加之在缓慢冻结条件下，细胞内水分透出，减少了冰晶形成，从而避免细胞损伤。 
采用""慢冻快融""的方法能较好地保证细胞存活。标准冷冻速度开始为-1 到 -2℃/min，当温度低于-25℃时可加速，到-80℃之后可直接投入液氮内-196℃。【细胞数】"    1*10（6）
【生物安全级别】    1
【生物体】    人
【组织来源】    骨肉瘤
【细胞形态】    上皮细胞样
【细胞特性】    贴壁
【细胞活力】    95％（Viability by Trypan Blue Exclusion）
【细胞检测】    细胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌
"细胞常规培养传代流程请严格遵照无菌操作
1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加2-3ml 0.25%胰酶进行消化细胞注意把握消化时间，通常控制在1-2min
2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁松动时不建议消化到细胞漂浮去掉胰酶，加6-8ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落，吹散
3、取部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，把细胞悬液打匀，于培养箱中培养
4、注意培养基PH值变化情况，定期换液每周2-3次，待细胞密度达到80%以后重复1项操作或者冻存
特别注意：如使用公共实验室或者初次接触细胞培养，建议添加双抗培养
1、收到细胞后请尽快更换为含15%血清的新鲜培养基，如因特殊情况需要继续使用原瓶，请在原瓶培养基中额外添加10%的血清，原瓶培养基的继续使用时间最长不宜超过72小时
2、贴壁细胞收到当天切忌立刻消化，请将细胞换液后放置培养箱孵育到第二天再做消化传代，请优先选择直径6cm的培养皿进行传代培养
3、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时做好照片记录并联系实验室。【培养条件】"    详见细胞说明书
【传代方法】    建议1:2-1:3 两天换液一次
【冻存条件】    详见细胞说明书
【主要文献】    请具体查阅相关发表文章

几种实验室细胞培养基成分的作用：
1.NaHCO3的作用是什么？与CO2一起形成缓冲系统，保持培养基PH值稳定。
2.丙酮酸钠的作用是什么？丙酮酸钠可以作为细胞培养中的替代碳源，尽管细胞更倾向于以葡萄糖作为碳源，但是如果没有葡萄糖的话，细胞也可以代谢丙酮酸钠。
丙酮酸钠的贮存液浓度一般为50mM，-20℃保存，培养基中的终浓度为1mM.
3.加入HEPES有何好处？培养基中最常用的Buffer system是碳酸氢盐，它可提供营养，但却在生理PH值条件下会降低缓冲能力。而HEPES是一种很强的Buffer，加入HEPES能使细胞培养基在PH7.2-7.6条件下缓冲能力增强。Hepes的贮存液浓度一般为1M，常温保存。培养基中的终浓度为25mM，即5ml 1M的Hepes加入到200ml完全培养基中。
4.酚红的作用是什么？酚红在培养基中被用来作为PH值指示剂：中性时为红色，酸性时为黄色，碱性时为紫色。
5.谷氨酰胺的作用是什么？几乎所有的细胞对谷氨酰胺都有胶高的要求。谷氨酰胺脱掉氨基后，可作为培养细胞的能量来源，参与蛋白质的合成和能量代谢。在缺少谷氨酰胺时，细胞生长不良而死亡。所以，各种培养液中都含有较大量的谷氨酰胺。
谷氨酰胺在溶液中很不稳定，应置-20℃冰冻保存，用前加入培养基中。加有谷氨酰胺的液体培养基4度冰箱储存两周以上时，Saos-2人成骨肉瘤STR检测细胞应重新加入原来量的谷氨酰胺。
试验操作中常配制高浓度（100倍）的谷氨酰胺溶液（1ml/支），分装使用，-20℃保存。使用时，每支1ml的谷氨酰胺加入到99ml完全培养基中，使其终浓度为2mM培养基。
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