BCA蛋白质浓度定量试剂盒

 BCA蛋白质浓度定量试剂盒产品说明书（中文版）

主要用途

 BCA蛋白质浓度定量试剂是一种旨在使用二羧基二喹啉（Bicinchoninic acid）特异性鳌合与蛋白质结合的铜离子，产生紫色反应物，通过比色测定其最大光吸收来定量蛋白质浓度的权威而经典的技术方法。该技术经过精心研制、成功实验证明的。其适用于各种蛋白质（动物、人体、植物、微生物等）的含量检测，尤其适合于含有各种去垢剂处理的蛋白质样品。产品即到即用，操作简捷，性能稳定，检测敏感，定量精确。

技术背景

在碱性条件下，蛋白质可以将二价铜还原为一价铜（此为biuret反应），然后两个二羧基二喹啉或二辛可宁酸（Bicinchoninic acid；BCA）分子选择性地鳌合一个分子的一价铜，产生水溶性紫色复合物，在562nm波长显示高度敏感的最大光吸收，以定量蛋白质浓度。蛋白质的分子结构、肽键的数量、氨基酸性质（半胱氨酸、胱氨酸、色胺酸和酪氨酸）与色彩形成有关。其蛋白浓度和吸光值成线性正相关。该方法的最大优点在于不受样品中各种去垢化学成分的干扰。 

产品内容

反应液（Reagent A）   22毫升

显色液（Reagent B）  500微升

标准液（Reagent C）      2毫升

补充液（Reagent D）    10毫升

产品说明书      1份

保存方式

保存标准液（Reagent C）在－20℃冰箱里，其余的保存在4℃冰箱里；反应液（Reagent A），避免光照；有效保证6月

用户自备

15毫升锥形离心管：用于反应工作液配制的容器

96孔板：用于标准样配制和样品比色的容器

3毫升比色皿或玻璃管：用于样品比色的容器

分光光度仪或酶标仪：用于比色分析

实验步骤

实验开始前，移取5毫升反应液（Reagent A）到新的15毫升锥形离心管，加入100微升显色液（Reagent B），混匀后，标记为反应工作液，避免光照。然后将－20℃冰箱里试剂盒中的标准液（Reagent C）和待测样品置入冰槽里融化。

A．标准样品配制

1．准备1个96孔板，做好相应的标记

2．按下表配制标准样品反应液

1）分别移取适量的标准液（Reagent C）到96孔板里指定序号的样品孔里

2）分别移取适量的补充液（Reagent D）到96孔板里指定序号的样品孔里

3．轻轻摇动96孔板，混匀反应物

4．置于4℃温度下等待待测样品准备工作（如果样品已经就绪，则直接进行下列操作）

B．标准样和待测样品96孔板微量测定

• 分别移取20微升上述配制的标准样和待测样品到96孔板里指定序号的样品孔里
• 分别移取200微升含有反应液（Reagent A）和显色液（Reagent B）的反应工作液到96孔板的样品孔里
• 轻轻摇动96孔板，混匀反应物
• 37℃温度下暗室里孵育30分钟
• 置于室温下冷却5分钟
• 即刻放进分光光度酶标仪里测定：波长为562nm
• 实际读数为（样品读数－无离子水空对照读数）
• 绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值OD562，横座标（X）为蛋白质浓度（微克/毫升）
• 根据上述标准曲线，测出待测样品的实际浓度

C．标准样和待测样品比色皿标准测定

• 分别移取100微升上述配制的标准样和待测样品到3毫升比色皿或玻璃管里
• 分别移取2毫升含有反应液（Reagent A）和显色液（Reagent B）的反应工作液
• 轻柔涡旋震荡，混匀反应物
• 37℃温度下暗室里孵育30分钟
• 置于室温下冷却5分钟
• 即刻放进分光光度仪里测定：波长为562nm；置零
• 实际读数为（样品读数－无离子水空对照读数）
• 绘制蛋白质浓度标准曲线：纵座标（Y）为吸光值OD562，横座标（X）为蛋白质浓度（微克/毫升）
• 根据上述标准曲线，测出待测样品的实际浓度

注意事项

• 本产品为100次操作（96孔板测定），10次操作（比色皿测定）包括额外10次标准样96孔板测定
• 操作时，须戴手套
• 避免使用TX100处理样品
• 反应液（Reagent A）和显色液（Reagent B）出现沉淀，可稍微加热搅拌融解则可
• 反应工作液配制时，会呈现浑浊，但混匀后很快变清，呈现绿色
• 反应工作液配制后，可以在密闭状态和室温条件下，1周内性能维持稳定，但建议即配即用
• 建议使用恒温水浴，孵育反应物
• 测试敏感性取决于孵育条件：温度和孵育时间；通常室温下需孵育2小时
• 如果增加比色效果，可置于60℃温度下，孵育30分钟
• 反应结束冷却后，即刻进行比色测定，否则反应继续进行
• 反应结束后，超过1小时，则比色结果不能采信
• 可以使用玻璃或聚苯乙烯比色皿
• 建议增加无离子水作为背景空对照
• 比色测定后，比色皿须清洗彻底
• 酸性样品将会干扰比色检测
• 下列化学成分和浓度范围会干扰比色检测：

Ammonium Sulfate 5％ Iron

Ascorbic Acid Lipids

Catecholamines Mercaptoethanol

Creatinine Melibiose

Cysteine Phenol Red

EGTA Sucrose 10 mM

Glycerol Tryptophan

Glucose 10 mM Tyrosine

Glycine 1 M Sodium Acetate 2 M

Hydrogen Peroxide Sodium Phosphate 1 M

Hydrazides Uric Acid

• 避免化学成分的干扰，建议使用透析处理
• 本公司提供系列蛋白定量检测产品

质量标准

• 本产品经鉴定性能稳定
• 本产品经鉴定检测敏感