QPCR用cDNA试剂盒- qPCR RT Kit
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最适用于合成Realtime PCR用cDNA的逆转录试剂盒。
本试剂盒是最适用于Realtime PCR用cDNA制作的逆转录反应试剂盒。由于采用了本公司 高性能逆转录酶『ReverTra Ace』，反应效率非常出色。另外，通过改良，使得带入到 Realtime PCR反应体系中的逆转录反应液的影响降到最小，即使在PCR反应体系中添加 了多至20％体积的逆转录反应液，也能表现出良好的反应曲线，因此，最适合用于表达量 较少的mRNA的高灵敏度测试。由于精简了试剂盒的构成，可非常简便地进行操作，仅需 约15分钟的逆转录反应，即可得到充分的cDNA。
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| 特征 |
由于使用了最恰当比例的mix primer（oligo dT和Random primer）、以及经改良的反应缓冲液，可实现高效率的逆转录反应。
特征2. 反应时间仅需15分钟
逆转录反应仅需15分钟即可完成。此外，即便是要除去对Realtime PCR反应有阻碍的残留的模板RNA，也无须追加RNase H处理。
特征3. 提高了和Realtime PCR试剂的适应性
通过改良，使带入到Realtime PCR反应体系的逆转录反应液的影响降到最小。即使在PCR反应体系中添加了多至20% (V/V)的逆转录反应液，也能表现出良好的反应曲线。因此，最适合用于表达量较少的mRNA的高灵敏度检测。
| 实验例 |
| 最新实验例 |
| 实验例追加1 低表达量基因的检测比较例 |
 实验例追加2 微表达量基因的检测比较例 |
以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板，根据各公司试剂盒推荐的条件进行逆转录反应。然后，在Realtime PCR反应液(使用本公司SYBR Green Realtime PCR Master Mix)中分别添加上述的逆转录反应液各1% (V/V)，用Realtime PCR对β-Actin和Polymerase ε的cDNA量进行定量。结果可见，在使用本试剂盒的情况下，两个目的片段都有最高的收量。
| 实验例2 RNase H处理与否对检测灵敏度影响的比较 |
| 实验例1 与用其他公司产品cDNA合成量的比较 |
以来源于HeLa细胞的total RNA 100ng为模板，使用ReverTra Ace qPCR RT Kit（蓝线）及另外添附RNase H的B公司cDNA合成试剂盒，按各自推荐的实验步骤进行逆转录反应(B公司试剂盒分别按RNase H处理（红线）/未处理（橙线）两种方法进行)。然后，按和实验例1同样的方法检测β-Actin的扩增效果。结果显示，用B公司的试剂盒RNase H未处理（橙线）的情况下，检测效果大幅下降。而用ReverTra Ace qPCR RT Kit（蓝线）进行反应，即便不追加RNase H处理也能显示出很高的扩增效率。已经过实验证明，用本试剂盒的情况下，RNase H处理与否灵敏度相等。
※本试剂盒不包含RNase H处理步骤。
在ReverTra Ace qPCR RT Kit的反应体系(10μl)中，分别添加HeLa细胞由来的total RNA 0.5μg - 0.5pg，分别进行逆转录反应。然后，采用和实验例2同样的方法扩增β-Actin基因。结果可见，在探讨的范围内，模板RNA的量和cDNA的收量密切相关，但无论模板RNA量的多寡，仍可维持很高的cDNA合成效率。由此可见，在目的片段浓度有差异的样品之间，逆转录反应效率的变化并不大，因此可将定量结果的误差控制在最小范围内。
| 实验例3 模板RNA量的添加量对合成效率影响的探讨 |
| 简要备注 |
A1. 要对tRNA等高表达量的RNA进行完全逆转录时，延长反应时间可提高合成量，但一般情况下按照标准的推荐条件37℃15分钟即可。
Q2. 可使用哪些模板RNA?
A2. Total RNA、mRNA、tRNA、rRNA等各种RNA都可以使用。
Q.3 需要进行RNase H处理吗?
A3. 由于残留的模板RNA会阻碍PCR反应，所以一般情况下逆转录反应结束后都要通过RNase H分解模板RNA。但本试剂盒运用本公司开发的新系统，在逆转录反应后可用非酶性方法除去模板RNA。因此，逆转录反应后无需RNase H处理。
| 参考文献 |
2）A.Nezu et al.,Biochem.J.,263:59−66（2002）
3）S.Nakashima et al.,J.Biochem.(Tokyo),131:241−246（2002）
4）S.Atsumi et al.,EMBO J.,20:5453−5460（2001）
5）Y.Yabuta et al.,Plant Cell Physiol.,41:666−675（2000）
6）S.Lee et al.,Gene,245:253−266（2000）
| 价格表 |
| 品名及内容 | 包装 | 保存 温度 |
Code No.
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价格 |
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ReverTra Ace qPCR RT Kit
・5×RT Buffer ・Enzyme Mix ・Primer Mix (oligo dT＋Random primer） ・Nuclease-free Water |
200次份*
200次份*×2
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-20℃ | FSQ-101 FSQ-101B |
RMB 1,500
RMB 2,760 |
| 相关产品价格表 |
| 品名及内容 | 包装 | 保存 温度 |
Code No. | 价格 |
| THUNDERBIRD SYBR（Probe）qPCR Mix |
1mL×5支
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-20℃
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QPS-201 |
1,500
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| 相关信息&FAQ |
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