NT检测,小鼠硝基酪氨酸ELISA试剂盒性能

1. 检测范围：0.25 nmol/L – 8 nmol/L。

2. 灵敏度：最低检测浓度小于0.1 nmol/L。

3. 特异性：不与其它可溶性结构类似物交叉反应。

4. 重复性：板内变异系数小于10% ，板间变异系数小于15% 。
NT检测,小鼠硝基酪氨酸ELISA试剂盒性能实验原理

试剂盒采用双抗体一步夹心法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被小鼠硝基酪氨酸（NT）捕获抗体的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的小鼠硝基酪氨酸（NT）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

技术小提示：

• 当混合或重溶蛋白溶液时，尽量避免起沫。
• 为了避免交叉感染，配置不同浓度标准品、上样、加不同试剂都需要更换枪头。另外不同试剂请分别使用不同的移液槽。
• 每次孵育时，请正确使用封板胶可保证结果的准确性。
• 混合后的显色底物在上板前应为无色，请避光保存；假如微孔板后，将由物色变成不同深度的蓝色。
• 终止液上板顺序应同显色底物上板顺序一致；加入终止液后，孔内颜色由蓝变黄；若孔内有绿色，则表明孔内液体未混匀；请充分混合。

操作步骤

1.   从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条，剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2.   设置标准品孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL；
3.   样本孔中加入待测样本50μL；空白孔不加。
4.   除空白孔外，标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗体100μL，用封板膜封住反应孔，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5.   弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液（350μL），静置1min，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复洗板5次（也可用洗板机洗板）。
6.   每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

  每孔加入终止液50μL，15min内，在450nm波长处测定各孔的OD值。