同源重组克隆试剂盒 一步法克隆 TOPO克隆

Hieff Clone® Universal II One Step Cloning Kit是新一代的同源重组克隆试剂盒，精心优化的第二代2× Hieff Clone® Universal II Enzyme Premix预混了重组酶和重组反应所需缓冲液，并添加了独特的重组增强因子，可显著提高重组克隆效率。
该试剂盒可以将PCR产物定向克隆至任何载体的任何位点，兼容未纯化PCR产物、直接回收的PCR产物、低浓度的胶回收产物，本产品可重组同源臂GC含量30%-70%的接头片段。将载体完全线性化，并在插入片段正、反向PCR引物5’端引入15-25 bp的线性化载体末端同源序列，使得插入片段PCR产物5’和3’末端分别带有与线性化载体两末端对应的完全一致的序列。PCR产物和线性化载体在重组酶的作用下，在50℃条件下最快仅需5 min即可完成重组反应。克隆阳性率可达95%以上。
 
组分信息

组分编号	组分名称	10923ES05	10923ES20	10923ES50	10923ES53
10923-A	2 × Hieff Clone® Universal II Enzyme Premix	50 μL	200 μL	500 μL	500 μL
10923-B	500 bp control insert (25 ng/μL)	5 μL	5 μL	5 μL	5 μL
10923-C	pUC 19 control vector, linearized (50 ng/μL)	5 μL	5 μL	5 μL	5 μL
10923-D	LB Powder预混培养基	-	-	-	3×0.5 L

 
储存条件
组分A、B、C：-25~-15℃保存，有效期1年。
组分D：室温保存，有效期2年。
 
性能展示
单片段6 μL小体系高效重组

图1. 在6 μL小体系非复苏感受态下，连接10 ng低投入量单片段。结果显示，10923ES性能好于竞品，连接效率高，菌落数多，阳性率达100%。A-B：重组转化平板。载体（10 kb）和插入片段（1 kb）摩尔比为1:2。C：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES。
低浓度多片段高效重组

图2. 分别连接低浓度的五片段和六片段。结果显示，10923ES在低浓度下连接性能稳定，菌落数多，阳性率100%。A-B：重组转化平板。载体（11.6 kb）和插入片段（5片段共5.6 kb、六片段共7.6 kb）摩尔比为1:2。C-D：插入片段PCR鉴定电泳图，M：Yeasen 10505ES，菌P长度2.6 kb。