MTT溶液(5mg/ml)

产品简介：

MTT是色法是一种检测细胞存活和生长的方法。MTT细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒（MTT Cell Proliferation and Cytotoxicity Assay Kit）被广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的检测。MTT检测原理在于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色Formazan并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。在特定溶剂(DMSO)存在的情况下，可以被完全溶解。然后通过酶标仪可以测定570nm波长附近的吸光度。细胞增殖越多越快，则吸光度越高；细胞毒性越大，则吸光度越低。

自备材料：

1、 细胞培养液

2、 胰蛋白酶消化液

3、 低速离心机

4、 96孔培养板

5、 细胞计数板或计数器

6、 DMSO或Formazan solvent

7、 摇床

8、 显微镜

9、 酶联免疫检测仪

操作步骤（仅供参考）：

1、 细胞用含血清的培养液培养至对数生长期，常规胰蛋白酶消化液消化细胞（悬浮细胞无需消化）。

2、 低速离心，收集细胞沉淀。

3、 用培养液重悬细胞沉淀，制备成单细胞悬液，并计数。

4、 细胞接种于96孔培养板，一般接种密度为3000~10000/孔。通常细胞增殖实验每孔加3000个细胞，细胞毒性实验每孔加入6000个细胞即可。具体每孔所用的细胞的数目，需根据细胞的大小，细胞增殖速度的快慢等决定。

5、 37℃5%CO₂继续培养或按照实验具体需要进行培养，一般培养6~24h。

6、 按照实验具体要求，给予0~20μl干预药物处理，37℃5%CO₂继续培养至合适时间。

7、 弃培养液，每孔加入10μl MTT Solution和100μl新鲜培养液，在细胞培养箱内继续孵育4h。

8、 弃培养液，每孔加入110μl DMSO，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。如果紫色结晶较小或较少，溶解的时间会短一些。如果紫色结晶较大或较多，溶解的时间会长一些。

9、 在酶联免疫检测仪570nm测定各孔吸光度。

注意事项：

1、 MTT Solution(5mg/ml)尽量减少反复冻融的次数，以免失效，当颜色变为灰绿色时，请勿使用。

2、 由于使用96孔板进行检测，如果细胞培养时间较长，应注意蒸发问题。

3、 MTT Solution在低温情况下会凝固，使用前请置于室温或20~25℃水浴至全部融解后使用。

4、 观察Formazan是否完全溶解，亦可以借助光学显微镜观察。

5、 培养细胞时尽量细菌避免污染。

6、 应注意设立OD调零孔和对照。

7、 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。