果聚糖[HK法]检测试剂盒-K-FRUCHK
简介:
果聚糖被定义为一种或多种果糖基-果糖键构成大部分键的任何化合物。这是指聚合物材料以及小至二糖菊糖的低聚物。本定义中包含的材料可能含有也可能不含有D-葡萄糖基取代基。果聚糖研究人员使用低聚物和聚合物这两个术语来区分可以具体表征的材料和不能表征的材料。
原理:
使用特定的蔗糖酶/麦芽糖酶将蔗糖和低聚合度(DP)麦芽糖(如果样品中存在)水解为D-果糖和D-葡萄糖(McCleary和Blakeney,1999)。淀粉和高DP麦芽糊精不会水解。 (1) (2).
(蔗糖酶,pH 6.5,40°C)
(1) 蔗糖+H2O ——> D-葡萄糖+D-果糖
(麦芽糖酶,pH 6.5,40°C)
(2) 麦芽糖+麦芽三糖 ——> D-葡萄糖
pH值调节后,通过使用己糖激酶/磷酸葡萄糖异构酶/葡萄糖6-磷酸脱氢酶分析程序直接分析D-葡萄糖和D-果糖来确定样品的空白值(3)(4)。
HK+PGI
(3) D-葡萄糖+D-果糖+ATP——> G-6-P+ADP
(G6P-DH)
(4) G-6-P+NADP+——>葡萄糖酸-6-磷酸+NADPH+H+
在该反应中形成的NADPH的量与D-葡萄糖加D-果糖的量是化学计量的。NADPH是通过340nm处吸光度的增加来测量的。
样品的果聚糖含量是通过将相同溶液的等分试样与超纯(重组/亲和纯化)内切和外菊粉酶(将果聚糖水解为D-果糖和D-葡萄糖)孵育来测定的(5)。然后分析这些溶液中的D-葡萄糖和D-果糖(3)(4)。果聚糖含量是通过从样品空白中减去吸光度值来确定的。
外源和内源菊粉酶,pH 4.5,40°C
(5) 果聚糖+水 ——> D-葡萄糖+D-果糖
套件:
Megazyme提供适用于进行50次果聚糖测定的试剂盒。试剂盒包含完整的检测方法以及:
瓶1:缓冲液(25 mL,pH 7.6)加叠氮化钠(0.02%w/v)作为防腐剂。
在4°C下稳定2年以上。
瓶2:NADP++ATP。在-10°C以下稳定5年以上。
瓶3:蔗糖酶/麦芽糖酶,冻干粉加BSA。在-10°C以下稳定>5年。
瓶4:果聚糖酶(重组、亲和纯化的外源菊粉酶和内切菊粉酶),冻干粉末。
在-10°C以下稳定5年以上。
瓶5:己糖激酶加葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和PGI混悬液,2.25 mL。在4°C下稳定4年以上。
瓶6: D-果糖标准溶液(0.5 mg/mL)在0.2%(w/v)苯甲酸中的溶液。
稳定时间>4年;在室温下密封储存。
瓶7:果聚糖控制面粉。大丽花果聚糖在α-纤维素存在下冷冻干燥。
稳定>5年;在室温下密封储存。
分析物:果聚糖
检测形式:分光光度计
检测方法:吸光度
波长(nm):340
信号响应:增加
线性范围:每次测定4至80µg D-葡萄糖、D-果糖或蔗糖
检测限:1 g/100 g
总检测时间:~30分钟
应用:面粉、植物材料(如洋葱)、食品和其他材料
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