美国biostone抗体试剂盒，大中华区总代理，厦门中创先锋科技有限公司，
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猪蓝耳病抗体检测试剂盒
AsurDx^TM  PRRS Antibody Test Kit
10020-02/05AA

一，概述
试剂盒用于检测猪血清中猪蓝耳病抗体。试剂盒原理是基于间接ELISA方法，酶标板上已经包被重组PRRS的N蛋白，添加样品后，样品中的抗体能与板上包被抗原特异性结合形成抗原抗体复合物，并与后面加入的酶标二抗结合，二抗上的酶再催化底物显色，显色深度与样品中的抗体含量成正相关。
 
二，试剂盒规格及组分

试剂盒组分	10020-02AA	10020-05AA	储存温度
抗原包被板 PRRS antigen-Coated Plate	2*96	5*96	4°C
阳性对照（红盖）Positive Control	1.8mL	2*1.8mL	4°C
阴性对照（白盖）Negative Control	1.8mL	2*1.8mL	4°C
酶标二抗HRP-Conjugated Antibody Solution	24mL	58mL	4°C
PRRS稀释液（绿色） PRRS Assay Diluent	50mL	120mL	4°C
20X洗板液  20X Wash Solution	56mL	120mL	4°C
TMB底物 TMB Substrate	24mL	58mL	4°C
终止液 Stop Solution 盖上有红色贴纸	24mL	58mL	4°C

备注：如果试剂盒超过一个月不使用建议阴阳性对照和酶标二抗-20°C储存。
三，试剂以及样品制备
1X洗板液：用19体积的蒸馏水稀释1体积的20X洗板液，得到1X洗板液。
血清样品稀释：在血清稀释板上使用绿色稀释液将样品血清稀释40倍，例如将5uL的血清加入到195uL的绿色稀释液中混匀，备用。
 
四，实验操作

试剂	每孔用量
稀释后的样品/对照 Diluted Sample/Control	100 ul
酶标二抗 HRP-Conjugated Antibody Solution	100 ul
1X洗板液 Wash Solution	2 ml
底物 TMB Substrate	100 ul
终止液 Stop Solution	100 ul

1. 实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出回复室温；
2. 加入100ul的阳性对照到抗原包被板两个孔中；
3. 加入100ul的阴性对照到抗原包被板的另外两个孔中；（强烈建议将阴性和阳性对照血清分隔加入，例如左上方加阳性对照，右下方加阴性对照）
4. 其他孔加入100ul稀释后的血清样品；
5. 轻微振荡1分钟；
6. 封板，室温（20-25°C）下孵育30分钟；（注意避免阳光直射和空气进入板中）
7. 弃去板中的液体；
8. 每孔加入300ul洗涤液洗板5次，最后一次请把板孔拍干；
9. 每孔加入100uL酶标二抗，封板，室温下暗处孵育30分钟；
10. 弃去板中的液体；
11. 每孔加入300ul洗涤液洗板5次，最后一次请把板孔拍干；
12. 每孔加入100uL的TMB底物，室温下暗处孵育15分钟；
13. 每孔加入100uL终止液，然后酶标仪630nm读数，请于终止反应后5分钟内读数；
 
五，结果判断
样品OD值-阴性对照OD值
样品PP值=----------------------------×100
阳性对照OD值-阴性对照OD值
有效性：阴性对照OD的平均值必须小于0.3，阳性对照OD值的平均值必须≥0.4
血清（单个）
阴性：样品的PP值小于40%，样品血清中抗体阴性
阳性：样品的PP值大于40%，样品血清中抗体阳性