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口蹄疫A型抗体检测试剂盒(cELISA)
AsurDx^TM FMDV Type A Antibody cELISA Test Kit
10065-02/05

一，概述
试剂盒用于检测猪牛羊血清中口蹄疫A型抗体。试剂盒原理是基于竞争ELISA方法，酶标板上已经包被纯化的口蹄疫A型抗原，样品和单抗加入后，如果样品含有口蹄疫A型抗体，样品中抗体与单抗竞争结合板上的抗原。洗板后，再加入酶标二抗孵育，酶标二抗会与单抗特异结合。洗涤后，再加入底物孵育，结合在板上的酶标二体的酶再催化底物显色，显色深度与样品中的抗体含量成反比关系。
 
二，试剂盒规格及组分

试剂盒组分	10065-02	10065-05	储存温度
抗原包被板 FMDV A antigen-Coated Plate	2*96	5*96	4°C
阳性对照（红盖） Positive Control	1.25mL	2*1.25mL	4°C
阴性对照（白盖）Negative Control	1.25mL	2*1.25mL	4°C
25X单抗Anti-FMDV Type A mAb-Biotin Conjugate	0.75 mL	1.5 mL	4°C
酶标二抗Streptavidin-HRP Conjugate	24mL	58mL	4°C
单抗稀释液 FMDV Conjugate Diluent	12mL	30mL	4°C
20X洗板液  20X Wash Solution	56mL	120mL	4°C
TMB底物 TMB Substrate	24mL	58mL	4°C
终止液 Stop Solution	24mL	58mL	4°C

备注：如果试剂盒超过一个月不使用建议阴阳性对照和酶标抗体在-20°C储存。
三，试剂以及样品制备
1X洗板液：用19体积的蒸馏水稀释1体积的20X洗板液，得到1X洗板液。
单抗：用1X的稀释液按照检测用量稀释25倍后使用，例如220ul 25x的浓缩液：5.28ml单抗稀释液混匀后足够1板试剂盒的用量。现配现用。
四，实验操作

试剂	每孔用量
样品/对照	50uL
单抗	50uL
酶标二抗	100uL
1X洗板液	2mL
底物	100uL
终止液	100uL

1. 实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出回复室温；
2. 设置好对照及样品在抗原包被板的位置；
3. 加入50uL的阳性对照到抗原包被板两个孔中（阳性对照使用前先振荡混匀）；
4. 加入50uL的阴性对照到抗原包被板的另外两个孔中；（强烈建议将阴性和阳性对照血清分隔加入，例如左上方加阳性对照，右下方加阴性对照）
5. 其他孔各加入50uL血清样品；
6. 每孔加入50uL单抗，轻微振荡1分钟；
7. 封板，37°C下孵育60分钟；
8. 弃去板中的液体；
9. 每孔加入300uL洗涤液洗板5次，最后一次请把板孔拍干；
10. 每孔加入100uL酶标二抗，封板，37°C下孵育30分钟；
11. 弃去板中的液体，每孔加入300uL洗涤液洗板5次，最后一次请把板孔拍干；
12. 每孔加入100uL的TMB底物，室温下暗处孵育15分钟；
13. 每孔加入100uL终止液，然后酶标仪450nm读数；
 
五，结果判断
样品阻断率PI值=[1-（样品OD值÷阴性对照OD值）]*100%
有效性：阳性对照的PI值必须大于65%，阴性对照OD值的平均值必须≥0.5
血清样品
阴性：样品的PI值小于40%，样品血清中抗体阴性
阳性：样品的PI值大于50%，样品血清中抗体阳性
可疑：在两者之间为可疑，可疑样品1-2周后重新测试