产品介绍:

重要信息: 本检测程序已于2023年8月更新(检测程序 08/23)，在检测试剂中增添了海藻糖酶悬浮液(7号瓶)。在检测程序的第二部分(测定a-葡聚糖)添加海藻糖酶可提高含海藻糖(a-D-吡喃葡糖基-(1,1)-α-D-葡萄糖苷)样品的α-葡聚糖测量值。因此，计算出的β-葡聚糖含量会下降。所有样品类型都应遵守更新后的检测程序。

(1-3)-β-葡聚糖广泛存在于自然界中，在藻类、真菌和酵母中尤为多见，也存在于高等植物中。β-葡聚糖具有多种生物学功能: 是细胞壁的主要结构成分，可作为碳水化合物贮藏，在有些情况下，受到刺激(例如，创伤)的部位也可能合成β-葡聚糖，以发挥保护作用。
中医在数百年前就已认识到许多蘑菇的药用功效，并将其入药。最近有研究证明，蘑菇中的关键活性物质是三萜类化合物、麦角固醇，以及最重要的1.3:1.6-β-葡聚糖。这类β-葡聚糖能够激活免疫系统，甚至可能具有抗癌功效。监管机构对这类营养补充剂的健康声称以及相关产品的标识和纯度表示担忧，尤其令人担忧的药用菌产品。相关研究已确定药用菌的关键活性成分为1,3:1.6-β-葡聚糖、三萜类化合物和麦角固醇。
目前已有研究对多种蘑菇的1.3:1.6-B-葡聚糖成分进行相当详细的研究，并确认其最主要的结构特征是以 1.3-β-葡聚糖为主链，以 1.6-β-葡聚糖为支链，且主链上的每3个或4个D-葡萄糖残基连接一条 1.6-β支链。但也有研究报告了更为复杂的结构 。蘑菇和真菌B-葡聚糖与谷物B-葡聚糖(所谓的混联B-葡聚糖)的结构差异非常大。谷物B-葡聚糖是线性多糖,其中 D-葡萄糖残基通过 1.3-B和 1.4-B糖苷键连接，而且这两种连接键的比例因B-葡聚糖的来源(例如，燕麦、大麦和小麦)而异。其他类型的β-葡聚糖包括纤维素(1,4-β-D-葡聚糖)和凝胶多糖(1,3-β-D-葡聚糖)。已有研究说明用于測定谷物 1,3:1.6-β-葡聚糖的高度特异性酶法检测程序。Megazyme提供基于这种方法的检测试剂盒:β-葡聚糖检测试剂盒(混联)(K-BGLU)。
商用酵母产品中描述了 1.3:1.6-β-葡聚糖的酶法检测程序 ,(包括纽勤的醇母β-葡聚糖酶法检测试剂盒(K-EBHLG))，但是目前尚无研究说明用于定量测定蘑菇子实体或菌丝体中B-葡聚糖含量的酶法检测程序。到目前为止，许多用于测量蘑菇β-葡聚糖的方法都是基于 Prosky膳食纤维检测程序改良而来。
本手册介绍了一种间接测定蘑菇和菌丝体产品、酵母和真菌制剂中 1,3:1,6-β葡聚糖含量的方法。本方法使用淀粉葡糖苷酶、蔗糖酶和海藻糖酶水解淀粉、麦芽糊精、蔗糖和海藻糖中的α-葡聚糖。如果样品中含有无法被这些酶水解的。葡聚糖，则会导致B-葡聚糖的测定结果偏高。
本测定程序不适用于在其他β-葡聚糖存在下的酵母/蘑菇β-葡聚糖分析,例如纤维素(1.4-β-D-葡聚糖)。
原理:
将 1.3:1.6-β-葡聚糖、1.3-β-D-葡聚糖和a-葡聚糖溶解于冰冷的 12 M 硫酸(H2SO4)中,然后在 2M硫酸中水解至接近完全 。然后使用高纯度外切-1,3-β-葡聚糖酶和B-葡萄糖苷酶的混合物将剩余的葡聚糖片段定量水解为葡萄糖。然后使用 GOPOD 试剂测定释放的 D,葡萄糖。这一步骤测定的是总葡聚糖含量。
淀粉、麦芽糊精、蔗糖和海藻糖中的a-葡聚糖，通过与淀粉葡糖苷酶、蔗糖酶和海藻糖酶一起孵育水解。然后使用 GOPOD 试剂测定游离的 D-葡萄糖和水解过程中释放的 D-葡萄糖。
本检测试剂盒先前的检测程序采用的是总葡聚糖盐酸水解法(替代方法)。
准确性:
标准误差通常小于 5%。
试剂盒:
可进行 100 次测试的检测试剂盒。
1号瓶: (x2)外切-1,3-β-葡聚糖酶与β-葡萄糖苷酶硫酸铵悬浮液，2.0mL。置于 4℃ 保存。有效期限请査看试剂瓶标签。
2 号瓶: 以 50%(v/v)丙三醇为溶剂的淀粉葡糖苷酶与蔗糖酶溶液，20mL。置于-10C以下保存。有效期限请査看试剂瓶标签。注意:如置于4℃ 保存，试剂有效期将缩短至2年以下。
3 号瓶: GOPOD 试剂缓冲液。
缓冲液(50 mL，pH7.4)。对羟基苯甲酸和叠氨化钠(0.09%)。置于4℃保存。有效期限请查看试剂瓶标签。
4 号瓶: GOPOD 酶试剂。葡萄糖氧化酶和过氧化物酶，以及4-氨基安替比林。冻于粉。置于-10°C以下保存。有效期限请査看试剂瓶标签。
5 号瓶: D-葡萄糖标准溶液(5 mL，1.00 mg/mL)，溶于 0.2%(w/v)苯甲酸中。置于室温下密封保存。有效期限请查看试剂瓶标签。
6号瓶: 酵母β-葡聚糖对照试剂(约2g，瓶身标签上标明β-葡聚糖含量)。置于室温下密封保存。有效期限请查看试剂瓶标签。
7号瓶: 海藻糖酶悬浮液(5mL)。置于4°℃ 保存。有效期限请查看试剂瓶标签。

规格：每个试剂盒100次检测
运输温度：环境温度
储存温度：短期稳定性：2-8°C，
长期稳定性：见单个组件标签
稳定性：在推荐的储存条件下>2年
分析物：β-葡聚糖
检测形式：分光光度计
检测方法：吸光度
波长（nm）：510
信号响应：增加
线性范围：每次测定4至100μg葡萄糖
检测限：3.6 g/100 g
总检测时间：~100分钟
应用实例：酵母制剂、蘑菇制剂等材料。
方法识别：新方法