西宝生物科技（上海）股份有限公司

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西宝生物（Seebio）--优势品牌 Wako、Jackson、Lumiprobe、APSC、Biomatrica、Elicity、Ludger、Laysan、Prospec、USP、Avanti、Megazyme、Chromadex、Cayman、LKT、TDB

西宝生物（Seebio）特色产品：糖类标准品，脂肪酸标准品，花青素标准品，类胡萝卜素标准品等食品分析标准品

背景：

任何处理的细胞培养都存在着微生物污染的风险。细菌和真菌造成的污染比较容易检测、预防以及去除, 然而支原体造成的污染不论是在发生率、检测、预防还是去除上都更为困难。
有超过20种不同类型的支原体从细胞培养物中被分离出来, 但是最常见的, 占到分离品种80-90%的主要是M.arginini, M.fermentans, M.hyorhinis, M.orale和Acholeplasma laidlawii.

支原体污染的后果？

1. 细胞培养中副作用：改变生长特点、细胞膜组成、染色体结构等等。

2. 不准确或者错误的实验结果。

3. 珍贵培养细胞的损失。

因此, 定期进行支原体检测, 确保无支原体的细胞培养体系, 最终才能获得高质量的、有效的实验数据。

所以，上海西宝生物科技有限公司（Seebio）隆重推荐MPBio高效的支原体“检测”和“去除”系列产品，如下： 

093050044，支原体去除试剂-MYCOPLASMA REMOVAL AGENT（MRA）

具有很强的抑制支原体活性的能力，从被污染的培养细胞中彻底去除支原体。

MRA属于抗生素喹啉家族的衍生物, 通过抑制支原体DNA旋转酶来去除支原体污染, DNA旋转酶是DNA复制过程中必不可少的酶类。 

 活性范围广

MRA的活性在细胞培养物中可以维持长达7天, 对多种支原体株系均有作用, 并且浓度达到0.5 μg/ml即可发挥功效。

作用浓度低，细胞毒性小

在推荐浓度下使用MRA, 细胞毒性极小, 因此也可以作为预防支原体污染使用的试剂。预防浓度为0.1 μg/ml即可。实验表明, 与其他品牌的同类产品相比, MP Biomedicals的MRA对正常培养的细胞没有致死效应。

防止支原体污染复发

一旦使用了MRA, 培养细胞就不会再受到同样的支原体污染, 从而起到预防污染复发的效果。

使用方便

MRA使用非常方便, 只要添加到支原体污染的培养细胞中孵化一周即可。

MRA提供的浓度是即拆即用型, 室温保存, 每瓶MRA含有5ml 4-oxo-quinoline-3-carboxylic acid衍生物 (浓度：50 μg/ml)。

References

1. Shubhra Singh & S. K. Puri & Kumkum Srivastava. Treatment and control of mycoplasma contamination in Plasmodium falciparum culture. Parasitol Res104:181–184, (2008).

2. O'Dea K.P., Pasvol G.: Optimal tumor necrosis factor induction by Plasmodium falciparum requires the highly localized release of parasite products. Infect. Immun., 71: 3155- 3164, (2003)

3. Rowe J.A., Scragg I.G., Kwiakowski D., Ferguson D.J.P., Carucci D.J., Newbold C.I. Implications of mycoplasma contamination in Plasmodium falciparum cultures and methods for its detection and eradication. Mol. Biochem. Parasitol., 92 : 177-180, (1998)

4. Peppel K., Jacobson A., Huang X., Murray J.P., Oppermann M., Freedman N.J. Overexpression of G protein-coupled receptor kinase-2 in smooth muscle cells atte-nuates mitogenic signaling via G protein-coupled and platelet-derived growth factor receptors Circulation, 102 : 793-799, (2000)

5. Trucco C., Javier Oliver F., De Murcia G., Menissier-de-Murcia J.: DNA repair defect in poly(ADP-ribose) polymerase-deficient cell lines. Nucleic Acid Res., 26 : 2644-2649, (1998).

093020000，支原体检测试剂盒-IMMUMARK MYCOTEST (免疫荧光检测法) 

  ImmuMark MycoTest 试剂盒是一款运用免疫荧光方法检测培养细胞中支原体污染的产品。该产品中使用的单抗CCM-2特异性针对最流行支原体株系中(包括Acholeplasma laidlawii, M. bovis M. hominis, M. hyorhinis, M. arginini, M. orale, M. fermentans, M. pulmonis, M. hyopneumoniae和M. salivarium等)的共同抗原。ImmuMark MycoTest 试剂盒提供两种检测方法。

直接检测：利用荧光标记的单抗CCM-2一步法快速筛选出可疑阳性。

间接检测：利用荧光标记的单抗CCM-2和FITC标记的二抗-山羊抗小鼠IgG对极度敏感的支原体进行检测

直接法或间接法孵育样品后, 用PBS冲洗掉多余试剂, 在荧光显微镜下观察结果(最大激发波长490nm, 平均发射波长 520nm, 放大倍率400~600X)。

结果

在感染细胞的边缘或在细胞之间可以观察到黄-绿荧光, 感染细胞呈现明亮的红色。在多数情况下, 支原体都是在细胞表面的一点密集排列。

试剂盒组成

荧光标记的CCM-2单抗-2ml

FITC标记的山羊抗小鼠IgG (二抗)-2ml

阳性样本/阴性样本对照玻片-2片

封固剂-2.5ml

093030000，支原体染色试剂盒-Mycoplasma Stain Kit

培养细胞中的细菌污染、酵母污染或霉菌污染都在光学显微镜下可见, 但支原体污染在光学显微镜下不可见, 必须通过特定的检测方法进行检测。

鉴别和确定支原体污染, 已知的方法有直接培养法, 支原体特异酶检测, RNA标记法, 放射自显影法, PCR技术以及DNA荧光染色法。上述检测方法中, 除DNA荧光染色法检测外, 都需要较长的时间以及多种实验设备及试剂支持, 操作步骤也比较烦琐。

DNA荧光染色检测法的优点是既灵敏, 又非常快速。有几种DNA荧光染料如DAPI、氮芥喹吖因、二盐酸喹吖因等, 但它们都不如Hoechst的荧光染色效果好。Hoechst染料的特点是缓慢淬火和最低的本底荧光。

MP Bio的支原体染色试剂盒(Mycoplasma Stain Kit)用于在培养细胞中原位染色检测支原体或其它原核生物。该试剂盒的原理是DNA荧光染色检测法, 采用的荧光染料为Hoechst 33258。Hoechst染色后在荧光显微镜下观察结果, 污染的类型可以根据其形态、大小以及其与培养的细胞的相互关系来确定。荧光显微镜下, 支原体是存在于胞质中的大小均一的荧光小点或短棒(丝状物), 而其他污染物的体积则会更大一些并且荧光更亮。

结果

样本应该在荧光显微镜下以400~1000X油镜镜头观察(激发波长：360nm；发射波长：490~500nm)。通过阳性和阴性对照玻片与结果的比较, 可以很容易的辨认出支原体。

未污染培养：

 在未被污染的培养物中只有细胞核被染色, 偶尔会出现从死细胞或破损细胞中释放的呈球形的微核或其他的核碎片,它们与支原体相比, 体积更大并且荧光更亮。

污染的培养：

被污染的培养中可以观察到细胞核被许多荧光小亮点包围着, 他们的直径普遍在0.1~0.3μm之间并且具有多形性, 形态可以从球形一直到细丝状。

试剂盒组成：

Hoechst染色33258-1x10ml

10X HBSS不含酚红和碳酸氢钠-1x10ml

封固剂-1x10ml

阳性/阴性对照玻片-5片