Annexin V 凋亡检测试剂盒
基本信息
性能参数
说明：
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）高亲和力特异性结合。以标记了FITC的Annexin Ⅴ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。
Propidium iodide（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin Ⅴ与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。
产品组成（50／25次反应）：
· Annexin V-FITC 500ul／250ul（20ug /ml）
· Binding Buffer 40ml／20 ml
· Propidium Iodide (PI) 250ul／125ul（50ug /ml）
保存条件: 2-8℃ 储存，有效期一年。
注意事项：
为保证得到理想的实验结果，在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项；
试剂（尤其是小瓶装的试剂）在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落；
Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用；
此试剂盒仅供科研使用，不宜用于临床诊断；
本试剂盒中提供的PBS为随试剂赠送，并非试剂盒的真正组成成分；细胞的洗涤同常规方法。
操作注意要点：
整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作；
反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰变；
Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物质，在操作时请注意避光；
成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上PS的密度、发生凋亡时PS翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，把这些影响因素进行优化对实验成功是非常必要的；
在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净，以免PBS残留，有可能会影响实验结果；
PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC染色，上机前5分钟再加入PI染色。
操作步骤：
调整待测细胞的浓度为5×105 ~1×106个/ml；
取1ml细胞，1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清；
加入1ml冷的PBS，轻轻震荡使细胞悬浮；
1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清；
重复步骤3、4两次；
对于贴壁细胞，先用胰酶消化，再用PBS洗涤；
将细胞重悬于200ul Binding Buffer；
加入10ul Annexin V-FITC和5ul PI，轻轻混匀，避光室温反应15分钟 或4℃反应30分钟。加入300ul Binding Buffer，在1小时内上机检测；
若用荧光显微镜检测，将细胞混合液离心，取细胞沉淀涂片，再进行观察。
细胞凋亡是细胞的基本特征之一，它在机体的胚胎发育、组织修复、内环境的稳定等方面起着十分重要的作用。Annexin Ⅴ是一种分子量为35-36kD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，能与细胞凋亡过程中翻转到膜外的磷脂酰丝氨酸（Phosphatidylserine，PS）高亲和力特异性结合。以标记了FITC的Annexin Ⅴ作为荧光探针，利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡的发生。
Propidium iodide（PI）是一种核酸染料，它不能透过完整的细胞膜，但在凋亡中晚期的细胞和死细胞，PI能够透过细胞膜而使细胞核红染。将Annexin Ⅴ与PI匹配使用，可以将凋亡早期的细胞和晚期的细胞以及死细胞区分开来。
产品组成（50／25次反应）：
· Annexin V-FITC 500ul／250ul（20ug /ml）
· Binding Buffer 40ml／20 ml
· Propidium Iodide (PI) 250ul／125ul（50ug /ml）
保存条件: 2-8℃ 储存，有效期一年。
注意事项：
为保证得到理想的实验结果，在使用此试剂盒之前请认真阅读该注意事项；
试剂（尤其是小瓶装的试剂）在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落；
Propidium iodide（PI）能通过皮肤吸收，对眼睛有刺激作用；
此试剂盒仅供科研使用，不宜用于临床诊断；
本试剂盒中提供的PBS为随试剂赠送，并非试剂盒的真正组成成分；细胞的洗涤同常规方法。
操作注意要点：
整个操作过程动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞，尽量在4℃下操作；
反应完毕后请尽快检测，因为细胞凋亡是一个动态的过程，反应1小时后荧光强度就开始衰变；
Annexin V-FITC和Propidium iodide是光敏物质，在操作时请注意避光；
成功的检测凋亡受以下几种因素的影响，如细胞类型、细胞膜上PS的密度、发生凋亡时PS翻转的比例、诱导细胞凋亡的方法、所用试剂、诱导凋亡的时间等，把这些影响因素进行优化对实验成功是非常必要的；
在细胞洗涤的最后一步，请尽量将上清弃净，以免PBS残留，有可能会影响实验结果；
PI染色时间过长有可能造成检测的凋亡率偏高，建议首先进行Annexin V-FITC染色，上机前5分钟再加入PI染色。
操作步骤：
调整待测细胞的浓度为5×105 ~1×106个/ml；
取1ml细胞，1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清；
加入1ml冷的PBS，轻轻震荡使细胞悬浮；
1000rpm，4℃离心10分钟，弃上清；
重复步骤3、4两次；
对于贴壁细胞，先用胰酶消化，再用PBS洗涤；
将细胞重悬于200ul Binding Buffer；
加入10ul Annexin V-FITC和5ul PI，轻轻混匀，避光室温反应15分钟 或4℃反应30分钟。加入300ul Binding Buffer，在1小时内上机检测；
若用荧光显微镜检测，将细胞混合液离心，取细胞沉淀涂片，再进行观察。
公司简介
北京宝赛生物技术有限公司成立于2000年10月，是一家专业从事生化、分子生物学试剂、免疫及实验室常用检测试剂的研究、开发、生产、销售的高新技术企业。公司具有国际水平的研发能力，先后自主研发了Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒、PDCD5系列产品（其药品已处于临床应用前阶段）及即用型水试剂等产品。公司为国内各科研院所与大学院校提供服务，产品遍布全国各地，同时产品远销东南亚，美国，欧洲等地区。我们致力于实验室研究试剂的成果转化和开发，不断推出创新成果，加快生物医药的研发速度。国际化的经营理念和思维方式已经融入我们的企业文化，并在研究开发﹑市场开拓等方面得以体现。为了适应发展需要，公司在原核表达载体构建、抗体制备等项目基础上，新增了重组腺病毒载体构建等一系列技术服务，以良好的服务质量赢得了客户的广泛赞誉。我们积极进取，努力创新，诚信经营。我们有光荣历史，但我们更把握今天，追求更好的明天。
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