细胞穿透型Cre重组酶

1．产品说明

本品具有野生型Cre重组酶的活性，可识别34bp的loxP位点，介导两位点间DNA发生特异性重组。根据loxP位点的位置和相对方向，重组产物不同：含单loxP位点的两条DNA将被融合；两个正向重复loxP位点间的DNA将以环状形式切割；两个反向loxP位点间的DNA序列将被翻转。

本品经遗传工程改造，具有直接转导真核细胞的能力。真核细胞与本品共孵育培养2小时，即可使细胞内loxp位点间发生重组，适合蛋白浓度可产生大于80%以上的重组效率。本品对于活跃分裂和处于静止期的细胞均具有相似的重组效率。

本品仅限研究使用。

特别注意：本品能够直接穿过细胞膜，可能会穿透皮肤引起异常。强烈建议在操作过程中务必使用乳胶手套等防护措施，确保皮肤不直接接触本品。一旦发生沾染，及时用流水充分清洗。

2．规格

产品的规格：液体

存储和效期：-20℃保存，有效期1年。

浓     度：4µg/µl，约相当于100µmol/L。

比 活  性：≧10,000 units/mg。

包装/货号：

3．本品直接转染细胞与传统质粒瞬间转染方法比较

4.使用方法

1) 细胞培养于合适的培养基中，长满至80%左右；对于胚胎干细胞，通常需要将细胞克隆消化分散，培养6小时后开始转导。

2) 将本品加入到含有0.1%BSA的无血清细胞培养基中,配置成浓度为8µmol/L。

J      转染培养基可以是无血清培养基，也可以加入10%的血清，但血清对转导效率有抑制作用。建议加入0.1%的BSA，可稳定酶效，保护细胞。

J      高浓度的Cre对细胞有毒性，建议使用浓度不要超过10µmol/L。

J      此处的8µmol/L使用浓度可根据不同细胞类型进行适当调整。

3）用上述含有细胞穿透型Cre的培养基替换正常培养基，并维持培养2小时。

4）转导完成后，用正常培养基洗涤细胞一次，然后加入适量的正常培养基继续培养。

5）正常培养24-48小时后便可进行重组克隆的筛选或重组效率检测等工作。

F   如优化条件，一般可使用浓度降低随之增加转染孵育时间，反之亦然的原则。增加正常的培养时间也可部分增加重组效率。

5．几种细胞类型的参考转导参数