外泌体分离纯化仪
BiWriter 外泌体分离纯化仪 详见 http://www.bitebo.com/a/gb2312/yiqi/biwriter/2025/0924/6030.html
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| 一、 仪器功能介绍
BiWriter 外泌体分离纯化仪集成度高: 1、集成自动化臭氧灭菌功能,实现自动化灭菌; 2、集成制冷功能,保持外泌体活性; 3、先进的传感器与操控系统结合,具备自适应过滤压力调控功能,维持高效的外泌体切向流过滤; 4、自动样品回收功能,一键操控浓缩后外泌体的回收; 5、过滤效率高,1H 内完成 500mL 细胞上清液的 20 倍外泌体浓缩富集, 4L 内完成 2L 细胞上清的 10 倍外泌体浓缩富集。二、 仪器使用介绍 外泌体分离纯化仪自带制冷功能,在仪器开机后通过对过滤板直接制冷,带动整个管路内部的自动降温。该制冷功能的主要目的为保护脆弱外泌体,避免外界环境与仪器过滤过程做功导致的温度上升。 1、 膜装载 1.1 、如上图所示,逆时针旋转仪器上部的两个手轮,将过滤隔板抬升。
1.2 、将超滤膜光滑面朝下,从过滤隔板的左侧装入过滤隔板下层(需要保证滤膜与隔板壁留有一定的缝隙,否者压紧后由于膜的重叠作用导致过滤隔板上下层不能有效贴合)。 1.3 、顺时针旋转两个手轮(需交叉或同时旋钮两个手轮,保证上滤板前后同时下降)至上过滤隔板卡入下过滤隔板凹槽内。用力反复旋钮 2 个手轮,至手轮不能用力拧动为止(建议在拧不动后,用仪器配备的长杆卡入手轮并再次拧紧)。 2、 管路连接 如上图所示,将回流与样品回收的(1、2)管路连接至射流器,滤过液(3)管路连接至射流器,进液(4)管路连接至载样瓶,射流器回流口(5)连接到废液缸。 3、 膜清洗 http://www.bitebo.com/uploads/250924/1_160415_1.png
3.1 、如上图红框部分所示,选择要清洗的液体总量(如 300ml,500ml)。 3.2 、在灭菌瓶中加入超过清洗量的去离子水(或瓶装娃哈哈纯净水),并将灭菌瓶放在屏幕后的载物台上。 3.3 、点击红框部分的“START”按键,启动仪器的膜与管路清洗功能。 3.4 、清洗完毕后,界面会显示清洗完毕提示即表示已经完成清洗。 4、 过滤前仪器的自动化灭菌 http://www.bitebo.com/uploads/250924/1_160433_1.png 4.1 、灭菌瓶中装入 500ml 的去离子水(或瓶装娃哈哈纯净水),瓶盖不得拧紧,保证可将瓶内的气体排��(灭菌时会产生臭氧)。 4.2 、为保证管路连接处的无菌,可在灭菌前,将 1,2,3,4,5 号管路接口喷上 3%过氧化氢,进行连接处的灭菌。 4.3 、将 5 号管路连接到灭菌瓶的回流管。
4.4 、红框部位点击选择灭菌时间,推荐时长为“120min”。点击红框内的“START”按键,启动灭菌程序。 4.5 、灭菌原理:仪器会自动产生臭氧经 0.22μm 滤膜,通过管道 6 进入射流器,与管路内的去离子水均匀混合制备��臭氧水。而后仪器自动开启或关闭管路,将所有的管路进行灭菌。 4.6 、如最求快速灭菌可在灭菌瓶中加入 3%过氧化氢,选择“60min”进行快速灭菌。 4.7 、灭菌过程可观察过滤隔板两侧是否有液体流��并再次交叉拧紧 2个手轮(膜装载时如直接手拧手轮,由于有空气存在导致的拧紧过程中压合效果不是十分理想)。 5、 过滤隔板的耐压测试 5.2 、运行仪器 5min,期间观察是否有液体从过滤隔板渗��。如有液体渗��,则反复拧紧 2 个手轮,至液体不再渗��。
5.3 、点击“STOP”按键,结束压力测试。通过点击 2 次右上角的切屏按键,跳转回“Filter LOADING”页面。将 5 号管连接至废液瓶,并点击 “PUMP”按键将臭氧水排空。 6、 外泌体浓缩与回收 6.1 、点击屏幕右上角的切屏按键,将屏幕切换至“RUN SETTING”页面。 6.2 、将经过高压灭菌的样品瓶取��,将 4 号管与样品瓶的进液口连接,1 号管与样品瓶的回流口连接,2 号管与收集瓶连接,3 号口与滤过液收集瓶连接(样品瓶、收集瓶、滤过液瓶瓶盖不得旋死,保证常压状态)。注:样品瓶必需放在屏幕后的载物台上,系统在浓缩过程中才能感应液体变化,并依据设定的参数自动结束浓缩过程。 6.3 、将经过 0.22μm 滤膜过滤除去细胞碎片的细胞培养液加入样品瓶中。设置相应的参数:选择好样品的体积,浓缩倍数,及过滤压力。点击“START”按键,开始外泌体浓缩。 6.4 、浓缩过程中“RUN SETTING”页面的下半部分会实时更新并显示参数。其中压力、速度、滤��体积每隔 1S 更新一次,图表每隔 10S 更新一次。 6.5 、备注:A、另外一种接法为 1 号管保持原样,将样品瓶与 5 号管连接(此时 6 号管可以吸入经过 0.22μm 过滤的空气,补充样品瓶因滤��导致的瓶内压力损失。)B、如仅收集滤��液,可保持 1,2 好管原连接不动,5 号管连接至样品瓶,3 号连接至滤过液瓶。
6.6 、浓缩结束后页面会自动提示浓缩结束。此时如需要对浓缩的外泌体进行纯化,可加入 0.6 倍体积的生理盐水到样品瓶中,设定相应的参数,点击“START”按键进行纯化,去除多余的蛋白。 6.7 、重复上述 6.6 过程,即完成全部的纯化步骤。 7、 样品回收 http://www.bitebo.com/uploads/250924/1_160549_1.png 7.2 、点击“PUMP OUT”按键,进行样品回收。 7.3 、系统自动会自动确认将样品泵至收集瓶,并结束样品回收程序。
9、 样品回收后管路灭菌7.4 、如果由于样品瓶中液面低于管路,导致的样品瓶中部分浓缩液残留。可用物体对样品瓶进行单侧垫高,令液面高于进液管路,再次点击“PUMP OUT”按键。 7.5 、重复 7.4 直至样品完全回收入收集瓶。 7.6 、注:如果收集滤过液,则不需要执行此样品回收程序。 8、 样品回收后管路清洗 http://www.bitebo.com/uploads/250924/1_160619_1.png 8.2 、顺时针旋转手轮,将滤板压合,旋紧手轮。 8.3 、在“COLLECTION”页面,选择清洗的液体量,将各个管口归位至初始的位置(即与射流器连接位置),将去离子水放置在载物台上,连接 4 号管口与去离子水,5 号口连接废液缸。 8.4 、选择清洗量,点按“START”按键开始清洗,清洗完毕后,程序自动结束并显示清洗完成。 9.1 、在“COLLECTION”页面选择灭菌时长,并点按“START”按键开始灭菌。 9.2 、灭菌结束后在主机的左侧前部有开关按钮,按压按钮后关闭主机 (保护主机的制冷模块,该模块与主机同时开启与关闭)。 |
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北京毕特博生物技术有限责任公司(Beijing Bitab Biotech Co.,Ltd)是一家成立于2001年(始于1994年的毕龙转基因),经营生命科学用品的高科技企业。全国最早的生物代理公司之一,多个国际知名品牌国内第一家代理。公司主要代理各大国际著名生物公司的试剂、仪器、设备和耗材等。同时提供各类生物技术服务、协助科研设计和数据处理、组织国内和国际学术会议、提供相关网络服务等。
MP Biomedicals生物医学公司是位于美国加利福尼亚州的知名生命科学和生物技术厂商。它致力于生命科学领域的基础研究和探索。目前它提供55000多种产品,是世界上能全面提供生命科学产品和临床诊断产品的唯一几家厂商之一。
lonza(原为美国Cambrex成立于1981年),是全球人类健康与生物科学产品最主要的供应商,同时还是饲料添加剂的生产商和动物健康/农业市场的媒介以及优质化学试剂的制造商。主要有细胞株、培养基、分子生物学产品、内毒素检测试剂等
Alexis公司是一家集生命科学试剂研发、生产和销售于一体的综合性私营企业,它已经在世界范围内成功建立了稳定的市场达10年之久,具备超强的管理体系和电子商务能力。Alexis公司总部在美国,并在英、德、瑞士均设有分部,便于试剂的运输和调配。此外,该公司还拥有资深的生物领域专家做为技术支持,并且代理其它品牌的一些生命科学领域主要研究方向的产品。
以色列Prospec公司是一家世界著名的重组细胞因子、生长因子、趋化因子、激素、病毒抗原蛋白、相关抗体的供应商。
ICN生物医学化学药品公司从1960年成立以来,随着其生物医学科研产品的开发和扩展,现在已经成为整个世界上生物技术科研产品和医学临床诊断产品的身居主导地位的供应者。ICN现在供应数千种化学药品、化学试剂、实验设备和诊断器械,能够满足整个生物技术领域的全部需求。
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