遗传霉素(G418)干粉
遗传霉素(G418)干粉产品及特点
G418又叫Geneticin(遗传霉素),分子式为C20H40N4O10·2H2SO4,分子量为692.71,CAS号为108321-42-2,白色结晶,溶于水。在分子遗传试验中,是稳定转染最常用的抗性筛选试剂。
它通过干扰核糖体功能而阻断蛋白质合成,对原核和真核细胞都有毒性。真核细胞中表达细菌APH(氨基糖苷磷酸转移酶)的基因(源自Tn5),可使G418失去作用。
常温运输,4℃避光保存、有效期一年。
遗传霉素(G418)干粉细菌的培养和收集:
将含有质粒pBS的DH5α菌种接种在LB固体培养基(含50μg/ml Amp)中, 37℃培养12-24小时。用无菌牙签挑取单菌落接种到5ml LB液体培养基(含50μg/ml Amp)中,37℃振荡培养约12小时至对数生长后期。
遗传霉素(G418)干粉质粒DNA少量快速提取:
质粒DNA小量提取法对于从大量转化子中制备少量部分纯化的质粒DNA十分有用。这些方法共同特点是简便、快速,能同时处理大量试样,所得DNA有一定纯度,可满足限制酶切割、电泳分析的需要。
遗传霉素(G418)干粉(一)、煮沸法
1、将1.5ml培养液倒入eppendorf管中,4℃下12000g离心30秒。
2、弃上清,将管倒置于卫生纸上几分钟,使液体流尽。
3、将菌体沉淀悬浮于120ml STET溶液中, 涡旋混匀。
4、加入10ml新配制的溶菌酶溶液(10mg/ml), 涡旋振荡3秒钟。
5、将eppendorf管放入沸水浴中,50秒后立即取出。
6、用微量离心机4℃下12000g离心10分钟。
7、用无菌牙签从eppendorf管中去除细菌碎片。
8、取20ml进行电泳检查。
XY130413肝素琼脂糖5mL|50mLXY130417蓝胶琼脂糖5mL|50mLXY130421DEAE交换介质50mLXY130423Q交换介质50mLXY130422CM交换介质50mLXY130424SP交换介质50mLXY131020Sephacryl S-400基质10mLXY130425苯基介质50mLXY130426丁基介质50mLXY130427丁基硫介质50mLXY130418Protein A琼脂糖1mLXY130420Protein G琼脂糖1mLXY131201Protein A+G琼脂糖2mLXY100939福林酚试剂100mLXY90610卵白蛋白标准品1mLXY131070牛血清白蛋白标准品1mLXY131071牛血清γ 球蛋白标准品1mLXY131072预稀释BSA 蛋白标准品1mLXY131220预稀释BGG 蛋白标准品1mLXY131074SDS-PAGE 样品预处理试剂盒50次XY131122考马斯亮蓝R-25010gXY131123考马斯亮蓝G-25010gXY131078天然蛋白A1mgXY131079重组蛋白A1mg
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