T4 RNA 连接酶 2 (截短型 K227Q)
T4 RNA 连接酶 2 (截短型 K227Q)产品及特点:
T4 RNA 连接酶 2(截短型 K227Q),又称T4 Rnl2tr K227Q, 可特异地将5 末端预腺苷化的DNA或RNA连接到RNA 3 OH 末端。该酶连接时不需要ATP,但需要预腺苷化的接头。T4 Rnl2tr K227Q 是 T4RNA 连接酶 2 截短型 的点突变体,K227 的突变减少了酶、赖氨酰及腺苷复合物的形成,也降低了非特异性的连接产物(多连体和环状体) ,后者可能是通过降低该酶从接头向RNA5磷酸基转运腺苷基团的微量活性而实现的。 该酶在连接反应中,无需 ATP,利用预腺苷化的接头和降低的酶-赖氨酰腺苷化活性能将连接背景降为最低。此酶已被用于 microRNA 克隆中接头的优化连接。
1. 将预腺苷化的 DNA 或 RNA 序列标签连接到任何 RNA 3 末端
2. 将单链腺苷化引物连接至小 RNA 上,用于 cDNA 克隆文库构建
3. 将单链腺苷化引物连接至 RNA 上,用于链特异 cDNA 文库构建
4. 无单链和双链 DNA 核酸外切酶、核酸内切酶、RNase 以及磷酸酶的污染。
反应条件
1X T4 RNA 连接酶反应缓冲液 [50 mM Tris-HCl (pH 7.5 @ 25℃) ,10 mM
MgCl2,1 mM DTT],25℃ 温育。
随酶提供试剂
单位定义
200 单位指 10 μl 反应体系中,25℃ 条件下,1 小时将 80% 的 31-mer RNA连接到预腺苷化 17-mer DNA 末端 [通用 miRNA 克隆接头] 所需的酶量。5´-FAM- rArGrUrCrGrUrArGrCrCrUrUrUrArUrCrCrGrArGrArUrUrCrArGrCrArArUrA-3´5´-rAppCTGTAGGCACCATCAAT–NH2-3´
Buffer成分
10 mM Tris-HCl,100 mM NaCl,0.1 mM DTT,0.1 mM EDTA,50%Glycerol,pH 7.5 @ 25℃
热失活
65℃ 加热 20 分钟。
参考文献
(1) Ho, C.K. et al.(2004)Structure, 12, 327–339.
(2) Ho, C.K. and Shuman, S. (2002) Proc. Natl.Acad.Sci. USA, 99,12709–12714.
(3) Nandakumar, J. et al. (2004) J. Biol. Chem., 279, 31337–31347
(4) Pfeffer, S. et al. (2005) Nat. Meth., 2, 269–276.
(5) Chen, P.Y. et al. (2005) Genes and Dev., 19, 1288–1293.
(6) Aravin, A. and Tuschi, T. (2005) FEBS Letters, 579, 5830–5840.
T4 RNA 连接酶 2 (截短型 K227Q)细胞生物学研究有以下几个方面:
细胞生物学的研究内容十分广泛,主要包括:①细胞核、染色体以及基因表达的研究;②生物膜与细胞器的研究;③细胞骨架体系的研究;④细胞增殖及其调控;⑤细胞分化及其调控;⑥细胞的衰老与编程性死亡(凋亡);⑦细胞的起源与进化;⑧细胞工程.
T4 RNA 连接酶 2 (截短型 K227Q)细胞生物学研究的常用技术有哪些:
1.显微技术:包括显微观察,显微操作.
2细胞组分分析技术:离心分离技术,生物大分子定位技术,定量细胞化学分析技术.
3.细胞工程:细胞培养。
T4 RNA 连接酶 2 (截短型 K227Q):XY100844PCR优化试剂盒1套XY90302氯化锰溶液,PCR级5mLXY70905明胶溶液,2%,PCR级1.5mLXY61203高GC DNA清除剂,PCR级1.5mLXY130307二氯化锰溶液,25mM,PCR级5mLXY130840硫酸镁溶液,10mM,PCR级5mLXY130841石蜡油,PCR级10mLXY80205DMSO,PCR级1.5mLXY130506海藻糖溶液,1.5M,PCR级1.5mLXY70902甜菜碱溶液,5M,PCR级1.5mLXY70909绿如蓝染料,PCR级0.1mL|1mLXY51208dNTP溶液,10 mM0.5mL(B)|5mL(B)XY131038dUTP溶液,100 mM0.4mLXY130920dITP溶液,100mM0.5mLXY120615dATP溶液,100mM0.5mLXY120617dTTP溶液,100mM0.5mLXY120619dGTP溶液,100mM0.5mLXY130917dCTP溶液,100mM0.5mLXY131139Deaza dGTP溶液,5mM0.4mLXY131140双脱氧dNTP溶液,10mM40uL×4XY131141dNTP和引物清除剂100次XY131212PCR Mix染料10mL
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